试验双缩脲法测定蛋白质含量.ppt

?基本原理： 碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 考马斯亮蓝染色法 考马斯亮蓝在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律 ，因此可以通过测定染料在595nm处光吸收的增加量得到与其结合的蛋白质量。该法简单、迅速、干扰物质少、灵敏度高10－100μg （比Lowry法灵敏4倍）。 Coomassie Dye-Based 蛋白质定量 PROTEIN + Amax = 595nm BLUE Acid Coomassie G-250 Protein - Dye Complex O CH 2 CH 3 NH C CH 3 CH 3 N CH 2 SO 3 - CH 3 CH 2 N CH 2 CH 2 CH 3 SO 3 Na + 蛋白质含量的测定 紫外吸收法 双缩脲法 Folin-酚法 考马斯亮蓝法 检测 波长 280 nm 540 nm 650 nm 595 nm 检测 范围 0.1-1.0 mg 1-10 mg 25-250μg 10-100 μg 繁琐 程度 简便 较简便 较简便 较简便 应用 纯度高样品 快速但不十分精确 受多种因素干扰 干扰较少 本次实验采用双缩脲法测定蛋白质含量 一、操作步骤 1.取15支试管，按下表编号、加试剂（做2个平