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* 3.Beige（bg）小鼠 为NK细胞活性缺陷的突变系小鼠，bg是隐性突变基因，位于第13号染色体上。纯合的小鼠（bg/bg）被毛完整，但毛色变浅，耳廓和尾尖色素很淡。这种小鼠其内源性NK细胞功能缺陷。纯合bg基因降低杀菌活性。 bg对化脓性细菌感染非常敏感，对各种病原因子也都较敏感， bg小鼠必须在屏障环境中才能较好的生存。繁殖时可采用纯合子的亲本。 * 4.SCID小鼠 SCID小鼠的全称为“重症联合免疫缺陷”小鼠。其突变点在16号染色体上，为单基因突变，突变符号为scid，当其纯合时，性状表现为淋巴细胞抗原受体基因编码顺序异常，造成T、B淋巴细胞不能分化为特异性的淋巴细胞，目前已有多种不同品系的SCID小鼠。 * SCID小鼠的生物学特征： 外观与普通小鼠无异样，但其胸腺、脾、淋巴结等免役器官的重量不到正常小鼠的30%。其胸腺多为脂肪组织包围，没有皮质结构，仅残存的髓质。外周白细胞较少，淋巴细胞仅占总数的10-20%（正常小鼠为70%）。 饲养环境 SCID小鼠需在屏障环境（ 空气洁净度万级以下）中，方能存活一年以上。其繁殖生产，以近交系繁殖方式进行，产子率和离乳率均低于正常小鼠。 * 5.Motheaten小鼠 突变基因（me）位于第6号染色体上，出生后两天内即可有病变现象，表现为皮肤脓肿，有严重的联合免疫缺陷现象。对胸腺依赖和不依赖抗原均无反应，细胞毒和自然杀伤细胞活性低下。此小鼠对于先天性早期免疫缺陷和某些自身免疫疾病的研究有着重要的价值。 * 6.人工定向培育的多联免疫缺陷型小鼠 目前，常见的三种小鼠的三个隐性免疫基因，即 NK细胞缺陷的Beige基因、T细胞缺陷的nu基因和B细胞缺陷的Xid基因。可将它们杂交- 回交，筛选出T、B、NK细胞三联免疫缺陷小鼠。这种小鼠对于实验性的肿瘤移植和免疫功能的研究有着极其重要的作用。 * 转基因动物的概念 所谓转基因动物就是把外源性目的基因导入动物的受精卵或其囊胚细胞中，后改用注入受精卵的任何一个前核，并在细胞基因组中稳定整合，再将合格的重组受精卵或囊胚细胞筛选出来，采用借腹怀孕法寄养在雌性动物（foster mother）的子宫内, 使之发育成具表达目的基因的胚胎动物, 并能传给下一代。这样，生育的动物为转基因动物。这类动物由于外源性目的基因的稳定存在而赋于子代动物个体。 * 转基因动物技术的主要步骤 获取外源目的基因 外源目的基因导入生殖细胞或胚胎干细胞 选择携带目的基因的细胞，选择体外培养系统和宿主动物 转基因胚胎的发育及鉴定 筛选所得的转基因动物 * 目的基因的制备 目的基因的制备·目的基因的获得 逆转录合成法 化学合成法 PCR扩增法·目的基因的扩增 通过载体在宿主中克隆 通过PCR扩增目的基因 * 目的基因的导入 ○ 脂质体介导法 · 脂质体是磷脂在水中形成的一种由脂类双分子层围成的囊状结构 · 形成囊状结构可将DNA包在其中 · 带有外源DNA的脂质体通过细胞的内吞作用进入受体细胞，达到基因转移的目的 ○ 血影细胞介导法 · 血影细胞：哺乳动物细胞溶血，使血红蛋白大量逸出，最后成为仅有被细胞膜包被的细胞核结构 · 血红蛋白大量逸出时，外源DNA也容易进入。让血影细胞与受体细胞在适当条件下发生细胞融合，从而使外源DNA导入受体细胞 ○ 电转移法 受体细胞与外源DNA按一定比例混合后，放入电脉冲槽中，经用脉冲电压刺激，外源DNA即可进入细胞（或受精卵） * 目前应用于生产转基因动物的方法 -原核显微注射 生殖细胞载体 反转录病毒转染 体细胞核移植 胚胎干细胞技术 应用较早并且被公认和成熟的技术 最具应用潜力的并且也是目前发展最快的技术 * 原核注射 显微注射法是建立得最早的转基因方法，也是目前使用最为广泛、最为有效 的方法。其所具有的优点是:基因的转移率高，整合效率可达30%:可直接用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移;外源基因的长度不受限制，可达几百kb;常常能得到纯系动物;实验周期相对比较短。 * 外源基因 基因微注射 移植受精卵 小鼠出生 转基因鼠的检测 繁殖后代 * A :准备注射的原核清晰的卵母细胞 B:注射过程 C: 注射后的卵母细胞 D: 吸取基因注射液 * 转GFP绿色荧光胚胎 * 转GFP绿色荧光胚胎 * 生殖细胞载体技术 有体外和体内转染生殖细胞的两种方法，前者又包括精子载体法、卵子载体法、受精卵载体法、胞浆内精子注射法等。 精子载体法是将成熟的精子与外源DNA的载体共同孵