天然药物化学课件第三章 糖和苷.ppt

1．纸色谱 展开系统：常用水饱和的有机溶剂展开。如： 正丁醇：醋酸：水（4：1：5上层）BAW 正丁醇：乙醇：水（4：1：2.2）BEW 水饱和苯酚等溶剂系统。 展开方式：上行、下行、径向 显色剂： 可利用糖的还原性或形成糠醛后引起的一些呈色反应。 如：邻苯二甲酸苯胺 硝酸银试剂（使还原糖显棕黑色） 三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色） 3,5-二羟基甲苯盐酸试剂（酮糖呈红色） 过碘酸-联苯胺（糖、苷和多元醇中有邻二-OH结构显兰底白斑） 2．薄层色谱 可采用——（硼酸液 + 无机盐）+ 硅胶 → 制板 吸附剂：硅胶（用0.03M硼酸液或无机盐的水液代水制板） 常用的无机盐——0.3M磷酸氢二钠或磷酸二氢钠 0.02M乙酸钠 0.02M硼酸盐缓冲液 0.1M亚硫酸氢钠/H2O 特点——增加糖在固定相中的溶解度，使硅胶薄层吸附能力下降，利于斑点集中，又可增加样品的承载量。 显色剂：除纸色谱应用的以外，还有——H2SO4/H2O或乙醇液 茴香醛-硫酸试剂 苯胺-二苯胺磷酸试剂等 3．气相色谱 将糖制备成三甲基硅醚（增加其挥发性） 醛糖用NaBH4还原成多元醇（制成乙酰化物或三氟乙酰化物） ↖（避免形成端基异构体） 4．离子交换色谱 糖的硼酸络合物——可进行离子交换色谱 优：不必制成衍生物，而直接用水溶液进行分离（与气相比较） 仪器——糖自动分析仪（automatic carbohydrate analyzer） 显色：3,5-二羟基甲苯-浓硫酸 波长：425nm 上样量：每种组成不超过1mg 洗脱剂：四硼酸钾的缓冲溶液 5．液相色谱 填充材料——化学修饰的硅胶 优：不必制备成衍生物。 适合分析对热不稳定的、不挥发的低聚糖和多糖。 分析单糖和低聚糖，其灵敏度不及气相色谱。 ㈡ 糖链结构的测定 主要解决三个问题 ——单糖的组成、糖之间的连接位置和顺序、苷键构型 1．单糖的组成 低聚糖、多糖的结构分析，首先要了解由哪些单糖所组成，各种单糖之间的比例如何。 一般是将苷键全水解，用PC检出单糖的种类，经显色后用薄层扫描仪求得各种糖的分子比。 也可用GLC或HPLC对单糖定性定量。 GLC常以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作标准。 2．单糖之间连接位置的决定 ①将糖链全甲基化→水解→甲基化单糖的定性和定量（气相色谱） （甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置） ②13C-NMR测定：主要归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。 3．糖链连接顺序的决定 ①缓和水解法——将糖链水解成较小的片段，然后分析这些低聚糖的连接顺序。 ②质谱分析。 4．苷键构型的决定 糖与糖之间的苷键和糖与非糖部分之间的苷键，本质上都是缩醛键，也都存在端基碳原子的构型问题。 苷键构型测定方法如下： ⑴分子旋光差（klyne法） 前以述叙。 ⑵酶催化水解方法 前以述叙。 ? 如：D-葡萄糖 ⑶1H-NMR判断糖苷键的相对构型 在糖的1H-NMR中——端基质子——δ5.0 ppm左右 其它质子——δ3.5~4.5 ppm间 可通过C1-H与C2-H的偶合常数，来判断苷键构型（α、β） ⑷其它 IR——α葡萄糖苷在770、780 cm-1有强吸收峰； MS——葡萄糖苷乙酰化物，331碎片峰强度：α β 用1H-NMR可判断一些糖的相对构型，但还有一些糖由于其结构上的原因，而无法利用1H-NMR来判断相对构型。如： ②苷元α-碳和糖端基碳手性不同时，端基碳和α-碳的苷化位移值比苷元为β-无取代的相应碳的苷化位移值大约为3.5ppm。 ? ? ? ? ? ? ▲酯苷、酚苷的苷化位移： 当糖与-OH形成酯苷键或酚苷键时，其苷化位移值较特殊，端基碳和苷元α-碳均向高场位移。 例： (在吡啶-d5中测) 例： (在吡啶-d5中测) ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?  （在甲醇-d5中测） ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 4、羰基反应 还原糖 + 苯肼 → 糖腙 （多为水溶性的） 还原糖 + 3分子苯肼 → 糖脎 （较难溶于水） ? ? ? ?  ? ▲2-去氧糖不能成脎（因C2上