拟修订后的猪胰岛素质量标准.doc

猪胰岛素 Zhu Yidaosu Porcine Insulin [增订] C C256H381N65O76S6 5778 【检查】 细菌内毒素? 取本品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含5mg的溶液，依法检查（附录XI E），每1mg胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。 微生物限度 取本品0.2g，依法检查（附录 XI J），每1g中含细菌数不得过300个。 [修订] 品名修订为“猪胰岛素”，汉语拼音名及英文名作相应修订。 “本品系自猪或牛胰中制得的具有降血糖作用的物质。按干燥品计算，每1mg的效价不得少于26单位。”修订为“本品系自猪胰中制得的具有降血糖作用的物质。按干燥品计算，每1mg的效价不得少于27单位。” 【性状】 “本品在水、乙醇、三氯甲烷或乙醚中几乎不溶；…”修订为“本品在水、乙醇中几乎不溶；…”。 【鉴别】 （1）在效价测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 （2）取本品适量，用0.1%三氟醋酸溶液制成每1ml中含10 mg的溶液，取20μl，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.3）20μl、0.1%V8酶溶液20μl与水140μl，混匀，置37℃水浴中2小时后，加磷酸3μl，作为供试品溶液；另取猪胰岛素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照效价测定项下的方法，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH2.3）-乙腈（90:10）为流动相A，乙腈-水（50: 时间（分） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 90 10 60 55 45 70 55 45 取对照品溶液和供试品溶液各25μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品的肽图谱应与对照品的肽图谱一致。 删去原鉴别（3）。 【检查】 “有关蛋白质”检查修订为“相关蛋白质”检查。即： 相关蛋白质 取本品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含有3.5mg的溶液，作为供试品溶液（临用新配，置10℃以下保存）。照效价测定项下的方法，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH2.3)-乙腈（82:18）为流动相A，乙腈-水（50:50）为流动相B，进行梯度洗脱。 时间（分） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 78 22 36 78 22 61 33 67 67 33 67 调节流动相比例使猪胰岛素主峰的保留时间约为25分钟，系统适应性试验应符合效价测定项下的规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，脱酰氨猪胰岛素不得过5.0％，其它相关蛋白质不得过5.0%。 “大分子蛋白质”检查修订为“高分子蛋白质”检查。即： 高分子蛋白质 取本品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含4mg的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法（附录V H）试验。以色谱用亲水硅胶为填充剂（3～10μm）；冰醋酸-乙腈-0.1％精氨酸溶液（15∶20∶65）为流动相；流速为每分钟 0.5ml；检测波长为276nm。取胰岛素单体-二聚体对照品适量（取胰岛素，60℃放置过夜）用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含4mg的溶液，取100μl注入液相色谱仪，胰岛素单体与二聚体的分离度应符合规定。取供试品溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，高分子蛋白质总量不得过1.0％。 锌 取本品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.1mg的溶液，作为供试品溶液。另取每1ml含锌（Zn）5mg的锌对照品溶液适量，用0.01mol/L盐酸溶液稀释，分别制成每1ml含锌0.20μg，0.40μg，0.80μg，1.0 0μg,1.20μg的溶液。照原子吸收分光光度法（附录IV D第一法）测定。以锌空心阴极灯作为光源，合适组成的空气-乙炔（例如每分钟11 L空气和2 L乙炔）火焰原子化，在213.9nm的波长处测量吸光度。按干燥品计算，含锌量不得过1.0%。 【效价测定】 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部 附录 V D）测定。 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；0.