酶在食品分析中实际应用.pptVIP

第十章 酶在食品分析中的应用;酶法分析的发展;酶法分析的发展;1. 酶法分析的特点及应用类型; 酶在食品分析中的应用类型;2 酶联免疫测定（ELISA）;2.1 ELISA的基本原理;ELISA试剂盒的组成;酶标仪和酶标板;2.2 ELISA的基本类型;双抗体夹心法;间接法;竞争法;2.3 ELISA测定中酶的作用;（1）酶标记的抗体或抗原的制备;（2）常用的酶及底物;为什么辣根过氧化物酶可应用于elisa？;2.4 ELISA技术在食品分析中的应用;（1）毒素检测;;黄曲霉素B1 ELISA试剂盒 ;（2）农药残留检测;从目前来看，尽管ELISA检测限度还不能完全达到国外发达国家技术法规和限量标准的要求，而且抗体制备不易和不能同时完成多种农药残留检测等缺点，但是由于该技术具有样本前处理简单，纯化步骤少，大量样本分析时间短，适合于做成试剂盒现场筛选等优点，使其可在蔬菜产区、蔬菜批发市场和海关配备，工商人员可随身携带或建立固定的农药残留速测点，随时把残毒超标的蔬菜、水果杜绝在食用之前。;（3）细菌污染检测;沙门氏菌的ELISA检测;李斯特氏菌的快速检测;（4）肉类品质检测;;几种以单克隆抗体为基础的ELISA反应已得到应用，可以检测出1%～2%的掺假率。目前在商业上，酶联免疫测定已可以检测十多种动物肉，该方法已为美国农业部使用。同时，ELISA技术也可以利用对热稳定的肌肉抗原来检测加热处理后的肉掺假情况。目前，该技术可以检测6种家畜熟肉制品。;（5）动物性食品中药物残留检测;如瘦肉精（盐酸克伦特罗）酶联免疫检测法，基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定，不仅可作为一个定性筛选过程，也可以进一步进行定量测定。检测灵敏度可达到0.5×10-9，完全达到我国农业部目前的1×10-9监督检测标准。ELISA法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确快速的特点，适用于大量样品的测定，并可能成为国家标准检测方法。;（6） 人畜共患疾病病原体检测;（7） 重金属污染检测;生物细胞，在环境受重金属污染（Cu、Hg、Cd、Pb、Zn与金属离子）的情况下，可被诱导合成出大量的金属硫蛋白，且在一定范围内成正比，是一项对金属污染具特异性的指标。用纯化的金属硫蛋白对兔进行免疫，兔抗血清纯化后并标记辣根过氧化酶，可实现对食品中重金属污染的超微量检测。;（8） 食物中其它成分检测;2 聚合酶链式反应（PCR）;PCR检测的原理;我国已应用PCR- 酶联免疫测定检测技术，建立了转基因大豆与玉米中常用外源基因的快速检测体系，并应用于进出境产品的转基因检测实际工作中，结果表明，PCR-酶联免疫测定法具有操作简便、灵敏特异、结果准确的优点，可对转基因大豆、玉米及其它转基因产品进行定性和定量检测。;PCR检测的应用;3 酶生物传感器;酶生物传感器的简图;酶传感器的优点;酶生物传感器在食品分析中的应用;酶电极在食品行业中的应用;生物传感器;4 酶抑制率法;农药残留的酶抑制率法测定;如用固定化小麦酯酶测有机磷农药，所得固定化酶对l0-7mol/L水平下敌敌畏的抑制仍有明显的响应，效果明显优于游离酶的抑制响应。 将该法作为蔬菜生产、销售企业进行日常农残监测和质量管理的快速检测手段是非常经济和有效的，具有广泛的实用性，也可作为质监部门监督抽查中的筛选检测方法。;此外，用溶液凝胶法固定α-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和葡萄糖氧化酶，将其用于流动注射化学发光分析体系，可实现对淀粉的快速检测，测定的线性范围为10～200 mg/ L，检出限为0.2mg/L，10次测定??相对标准偏差为1.8 %。用酶-重量法，可分别测定总的、不溶性及可溶性的膳食纤维，精确度高，适于一般食物如谷类、水果、蔬菜和保健食品测定。;谢谢！