如何测量体内药物浓度法.pptVIP

第二章 体内药物浓度法 第一节 体内药物浓度测定样本与实验动物 种属的选择 第二节 建立中药体内药物浓度测定方法的 技术要求 第三节 常用的中药体内药物浓度测定方法 第一节 测定样本与实验动物种属的选择 对于有效成分明确且有效成熟的定量分析方法测定的中药，可采用此法。 一、测定样本 常用的测定样本有： 血液（血浆、血清、全血）、 尿液、 唾液、 泪液（眼用制剂）、 乳汁（乳汁排除药物对乳儿的影响）、 脏器匀浆等. 二、实验动物的选择 1、尽可能与药理学、毒理学研究一致，以便联系药效学进行分析讨论。 2、最好从同一只动物多次采样，采样时间为自变量，必须准确，操作迅速。 3、小鼠、大鼠、兔（口服不用）、犬较为常用。 第二节 测定方法的技术要求 一、灵敏度高 血药浓度常在ng/ml级 。 二、专一性强 能排除药物代谢产物及机体 内源性物质的干扰。 三、准确度高，精密度高 四、快速、简便 第三节 常用的中药体内药物浓度测定方法 一、分光光度法 （一） 紫外分光光度法 （二） 荧光分光光度法 （三） 原子吸收光谱法 二、色 谱 法 （一）薄层层析（TLC）法 （二）高效液相（HPLC）法 （三）气相色谱（GC）法 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC） 是在经典液相色谱和气象色谱的理论与技术上发展起来的一种现代化色谱分析方法。该法由于采用高效固定相、高压输液泵、高灵敏检测器等新技术，从而成为色谱法中应用最为广泛的一种分析方法。具有样品适用范围广，预处理简单，快速，灵敏，专一等优点。 1. HPLC法的选择 高效液相色谱法的种类较多，包括液-固吸附色谱法、液-液分配色谱法（正相或反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法、凝胶色谱法。选择色谱方法必须考虑所分离化合物的化学结构和溶解度。关于选择各类高效液相色谱法的原则见下图。 2. 检测器的分类及选择 紫外检测器（UVD）：主要有以下几种类型： ①固定波长型：用得较多的是波长为254nm的紫外光。因大多数芳香族、芳杂环、稠芳环等在此处均有吸收。 ②可调波长型：相当于一台紫外可见分光光度计。由于波长可任意调整，可以选择试样的最大吸收波长进行检测，提高灵敏度。 ③扫描型：不仅可选择波长，还有快速扫描装置，记录组分的吸收光谱，使定性分析更方便。 ④光电二极管阵列型：一次操作可获得包括波长、吸收值和时间在内的三维谱图，还可得到难分离组分重叠峰的有关信息。 荧光检测器（FLD）：相当于一台荧光光度计。基于某些荧光物质吸收一定波长紫外光后发射出荧光，荧光强度与荧光物质的浓度成正比。 蒸发光散射检测器（ELSD）：其基本原理是样品气化后，溶质粒子的散射光强度与其浓度成正比。 此外还有视差折光检测器、电化学检测器等。 3. 样品预处理技术 （1）试样的预处理：生物样品中含有蛋白质和其它干扰物质，处理不好直接影响柱子的寿命和柱效。另外体液中药物及代谢产物含量很低，还需尽可能加以浓缩。 ①除去蛋白质等其它干扰物质，加入沉淀剂改变蛋白质等电点 ②溶剂提取法 酸性物质酸化 然后用与水不相溶的溶剂 碱性物质碱化 提取 表（7-16）列出了一般药品的提取方法。 表7-16 一般药品提取方法 样品性质 提取方法 水溶性样品 1.酸性药物及其盐 有机溶剂提取杂质后调成酸性,再加入有 机溶剂提取,或在N2流吹下,用适当溶剂溶 解后进样。 2.碱性药物及其盐 有机溶剂提取杂质后调成碱性，再加入有 机溶剂提取，可直接进样，或在N2流下吹干， 用适当溶剂溶解后进样。 3. 中性药物 有机溶剂提取后，直接用反相色谱法分析。 脂溶性样品 有机溶剂提取后，或进样，或在N2流下吹 干，用适当溶剂溶解后进样。 ③薄层色谱或预柱色谱分离 活性碳