基因载体选择和构建.ppt

* 其特点是插入的外源DNA没有明显的嵌合和缺失现象， PAC载体可以插入约300kb的外源片段，可以稳定遗传及高效扩增。 PAC除具有许多BAC载体的特征外，它的多克隆位点位于蔗糖诱导型致死基因sacB上，通过加入蔗糖和抗生素的培养基筛选出来的克隆都是含有插入片段的重组子。 * PAC 载体自身片段较大(约16kb) ，构建文库没有BAC 载体(约7～8kb) 效率高。PAC 载体在基因分离和序列分析当中，可作为YAC 连续克隆群的重要补充，日本水稻基因组计划(RGP) 已把水稻的PAC 文库用于物理图谱的构建。 * 但是YAC、BAC 载体不能直接进行植物转化，在候选克隆的转化互补实验中需要将外源片段进行亚克隆，因而工作量大，同时也有漏失目的DNA片段的可能。因此，可直接用于植物转化的大片段双元载体便应运而生，具有代表性的载体系统有BIBAC 和TAC。 * 六、其它大容量载体 双元细菌人工染色体(binary BAC, BIBAC) 可转化人工染色体( transformation-competent artificial Chromosome, TAC) 这些载体不仅具有较大的克隆容量，而且具备了直接转化植物进行功能互补实验的功能。 * 1.双元细菌人工染色体(binary BAC, BIBAC) 1996年，Hamilton等结合BAC载体和Ti质粒的特点，构建了双