免疫学测定原理细胞因子或受体.ppt

是由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的高活性、多功能、小分子多肽 TNF-α和TNF-β与同一受体结合，故两者生物学活性相似 用TNF-α与TNF-β特异性中和抗体作阻断试验，以区别两类TNF TNF活性测定靶细胞：小鼠成纤维细胞株L929、L-M、WEHI164.13 注意： 若选用L929细胞，其不宜生长过密。 细胞被某种因素激活后，代谢增强，线粒体脱氢酶活性也增强，着 色也会加深， MTT染色时，必须考虑待检样品中有无激活靶细胞的因素 特定疾病的辅助诊断 机体免疫状态的评估 临床疾病治疗效果的监测和指导用药 疾病预防 细胞因子的测定主要用于以下几方面： 一、临床应用原则 细胞因子和粘附分子的异质性、功能交叉性和多样性、来源的复杂性和组织细胞的非特异性，决定了在进行这些分子检测时，必须对方法选择和结果判断作出综合考虑。 细胞因子的检测方法多种多样，各有利弊。 高敏感性方法：特异性的降低、废弃物难处理 活性测定方法：定性试验 基因分析法：利于细胞内定位分析、操作烦琐 （一）方法的联合应用 常用的临床标本：抗凝全血，并分离获得单个核细胞 炎症局部细胞因子的水平：局部分泌液 细胞因子或粘附分子的细胞内定位检测：相应细胞 相应细胞因子的基因和mRNA表达：相应细胞 疗效观察和预后判断：疾病急性期和恢复期双份标本进行动态观测 免疫荧光染色和流式细胞分析：注意待检细胞的活性和状态，以保 证结果的特异性 （二）标本的适当选取 意义： 细胞因子具有网络调节的状调节的特点 级联效应或相互抑制作用的网络系统。 有助于提供有效的疾病诊断和机体免 疫状态信息 举例： T细胞、巨噬细胞和上皮样细胞分泌相应细胞因子的功能： IL-1、 IL-2、IFN-γ和GM-CSF Th1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ （三）细胞因子的联合检测 二、特定疾病诊断的辅助指标 （一）细胞因子检测在特定疾病诊断中的意义 许多疾病过程均可出现粘附分子和细胞因子表达的异常改变，高表达、低表达或是缺陷均可与某些特定疾病密切关联，同时还可反映疾病的进程 （二）粘附分子检测在特定疾病诊断中的意义 粘附分子有可溶性和膜结合性两种形式，均与机体的免疫状态和疾病的发生有关，在炎症、肿瘤转移和器官移植排斥反应中发挥着重要的作用。相关粘附分子的检测有助于此类疾病的诊断。 三、评估机体的免疫状态、判断治疗效果及预后 机体免疫应答的强弱可通过细胞因子或粘附分子的表达水平来反映，其过高或过低表达均系免疫调节异常的结果 细胞因子和粘附分子的水平，作为观察治疗效果和判断预后的重要指标 接受治疗的患者进行细胞因子水平的监测，对保证治疗效果具有指导意义 。 * * * * * * 第十六章 细胞因子与细胞粘附因子的测定 基 本 概 念 细胞因子： 细胞粘附因子： 介导细胞间或细胞与细胞外基质间粘附作用的膜性或可溶性分子 第一节 生物学测定方法 基于DNA检测的分子生物学测定法： DNA扩增法 RNA印迹法 原位杂交法 核酸酶保护分析生物活性测定法 分 类 根据细胞因子对特定的生物学活性,应用相应的指示系统,同时与标准品对比测定,从而得知样品中细胞因子的活性水平,一般以活性单位(U/ml)表示 生物学测定法原理 有助于细胞因子检测的活性作用包括 刺激细胞增殖或集落形成的活性维持细胞生长和存活的特性抑制细胞生长或破坏细胞的效应促进细胞趋化或抗病毒作用 以细胞因子依赖性细胞株为靶向，通过观察特定的细胞因子刺激或抑制依赖性细胞株增殖来评估细胞因子的活性水平。 生物学测定法原理 一、促进细胞增殖和增殖抑制法 直接计数法 简便、直观、费时、主观因素影响大、难以标准化和自动化 细胞代谢活性测定方法 3H-TdR、125I-UdR掺入法或MTT 细胞代谢产物测定法 代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表面标记或可溶性分子测定法 一、促进细胞增殖和增殖抑制法 细胞增殖检测方法分类 通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。在细胞的增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对核苷或碱基的需求增多，若将核苷标记上可以示踪的同位素（3H/125I ），通过检测细胞内的同位素含量，则可反映细胞增殖的程度。 结果客观易于自动化；适用于大标本量的测定 (1) 同位素掺入法（3H-TdR） 方法的特异性受依赖细胞株影响；放射性污染 常见细胞因子3H-TdR掺入检测法所需细胞及参考试验条件 M-CSF/G-CSF 4-8 24 5×104