传代细胞培养.ppt

传代细胞培养实验 指导教师 费晓方教授 2014年6月 实验目的和要求： 掌握无菌操作技术。 掌握传代细胞的培养的一般方法与步骤。 掌握贴壁细胞传代过程中的消化分散技术。 熟练细胞计数方法。 了解培养液配制方法。 熟练倒置显微镜的使用。 本次试验应用HeLa细胞或A375-S2细胞进行传代培养。 HeLa 细胞：人子宫颈癌细胞株 A375-S2细胞：人黑色素瘤细胞株 实验材料： 每组的超净台中备有以下物品： 1.材料 50ml RPMI1640培养液1瓶； 5ml小牛血清（FCS) 1瓶； 2ml胰蛋白酶 1瓶； 1ml谷氨酰胺 1瓶； 1ml Hepes 1瓶； PBS(-)1 瓶 实验材料： 每组的超净台中备有以下物品： 2. 器材 灭菌1ml移液管 1支； 装有试管的灭菌小饭盒 1个； 试管架1个； 1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个； 细胞计数板1块； 镊子1把，小烧杯1个； 酒精灯1台； 培养好细胞的细胞培养瓶1个 实验操作步骤： ： 1.超净台灭菌，打开风机，点燃酒精灯，消毒双手准备操作。 2.从培养箱中取出细胞，在显微镜下观察细胞形态。 3.配置应用培养液（含有10%小牛血清，1%谷氨酰胺，PH7.2-7.4的RPMI1640培养液）待用。 4.倒掉原有的细胞培养液，加入5mlPBS(-)洗涤2次。（注意：每次操作要用酒精灯对培养瓶口进行灼烧