硅胶膜型PCR产物纯化及胶回收试剂盒.DOCVIP

硅胶膜型?PCR产物纯化及胶回收试剂盒 操作方法 一、从琼脂糖中纯化/回收DNA片段 切取含DNA片段的琼脂糖后捣碎，按重量/体积比1:3（琼脂糖重量：NE结合液的体积）加入NE结合液。如200mg琼脂糖加600ml NE结合液。 将切取的琼脂糖捣碎有利于加速下一步凝胶的溶化 50~60℃水浴3~5分钟，胶完全融化即可，其间可上下颠倒2~3 将溶液转入离心纯化柱中，静置5分钟使DNA充分与硅胶膜结合，13,000rpm离心10~20秒，倒掉收集管中的废液。 适当增加DNA与硅胶膜结合的时间，使DNA与硅胶膜充分结合，能在一定程度上提高回收率。 加入500μl的80%异丙醇（或80%乙醇）于离心纯化柱中，13,000rpm离心10~20秒，倒掉收集管中的废液。 重复步骤4。 13,000rpm再次离心1分钟，尽量除去残余异丙醇或乙醇。 将离心纯化柱置于新的离心管中，开盖放置2~3分钟，使乙醇挥发殆尽。 一定使乙醇挥发干净，否则影响其回收率及纯度。 加入40~50μl无菌TE溶液或超纯水，静置3~5分钟，使洗脱液充分将硅胶膜浸透。 TE溶液或超纯水的用量视用户对DNA浓度的要求而定。将TE或超纯水50℃预热对提高回收率有一定帮助 13,000rpm离心1分钟，管底溶液即为所需的DNA。将DNA贮存于-20℃ 离心柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系，可开盖离心。 二、从溶液中回收D