本科癌基因与抑癌基因.ppt

本科癌基因与抑癌基因 * 3、转化阶段  已恶变的细胞进入自主分裂增殖状态。促癌阶段形成的增生性病灶会进一步浸润、转移。 本科癌基因与抑癌基因 *  1 2 3 4 5 本科癌基因与抑癌基因 * 实验证： 肿瘤是由多步骤多阶段或多次打击而发生的疾病。人类结肠癌的发展需要5-6个步骤的顺序 ●ras的突变 ●抑癌基因家族性多发性腺癌（FAP）、结肠  癌缺失(DCC)的丢失 ● c-myc基因的过度表达 ● p53的缺失是这些变化的积累，而不是它们之间发生的顺序。 本科癌基因与抑癌基因 * 本科癌基因与抑癌基因 * 本科癌基因与抑癌基因 * （二）原癌基因的激活1、ras基因的变异2．myc基因的变异 本科癌基因与抑癌基因 * (三)抑癌基因的失活1、Rb基因的失活2、p53基因的失活 3、其他：  BRCA1和BRCA2：与遗传性高发乳腺癌相关的基因，与卵巢癌的发生也紧密相关。 本科癌基因与抑癌基因 * 第三节 原癌基因与抑癌基因的检测及评价 基因检测 核酸扩增: PCR, RT-PCR 凝胶电泳: DGGF (变性梯度凝胶电泳） 核酸杂交: Southern blot , Northern blot, FISH 基因芯片技术 基因产物的检测 蛋白质: 原位检测，ELISA, RIA 本科癌基因与抑癌基因 * 一、检测方法：1、PCR／ASO探针法(PCR-allele-specific  oligonucleotide 该方法快速、灵敏度高，但点突变的检出仅限于突变探针的探测位点，不能检出探针邻近部位的点突变。 本科癌基因与抑癌基因 * 2、限制性片段长度多态性(RFLP)分析 本科癌基因与抑癌基因 * 3、PCR-SSCP、测序等 突变更易于检出，扩增的DNA片段在非变性凝胶电泳中，因电泳迁移率不同，所有突变的ras基因均可与相应的正常基因区分开来。并且，若同一位点发生不同核苷酸替代形成的点突变，或同一核苷酸在不同位点替代形成的点突变，均可显示不同的电泳迁移率。 本科癌基因与抑癌基因 * 4、Southern Blot DNA digestion with restriction endonuclease Transfer of the DNA to a membrane Hybridization with a specific probe autography Electrophoresis of the DNA 本科癌基因与抑癌基因 * Single-color FISH double-color FISH Detection of the BCR, ABL and BCR-ABL genes by single- and dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH). represents signals for ABL, for BCR. Chromosome are shown on the left and interphase nuclei on the right 9 22 Normal Ph1-positive Normal Ph1-positive 本科癌基因与抑癌基因 * 基因芯片 Stanford 乳腺癌微矩阵(Perou et al.1999) 本科癌基因与抑癌基因 * 三、肿瘤相关基因检测的临床应用与评价  只有极少数人肿瘤与其相关基因有密切特异性，如视网膜母细胞瘤与Rb基因、家族性结肠息肉与APC基因具有很高特异性，大多数肿瘤还不可能归纳出特异的基因改变。 肿瘤的基因诊断尚不能作为第一诊断手段。 本科癌基因与抑癌基因 * 与肿瘤诊断有关的癌基因 在肿瘤中较普遍表达：c-myc、c-fos、H-ras、k-ras 在肿瘤中特异性表达：c-abl、c-sis 临床意义尚不明确：c-mos、cyes、cfps、c-sac等 白血病：abl、ras； 多发性结肠息肉：c-myc 结肠癌，胰腺癌，肺癌：ras 乳腺癌，卵巢癌：BRCA1、c-erbB-2 本科癌基因与抑癌基因 * 1) Oncogene amplification : neuroblastoma N-myc, C-erb-B2 2) Oncogene overexpression : small cell lung carcinoma C-myc 3) Oncogene mutation : bladder cancer H-ras 4) Suppresso