染色体显微实际操作.pptVIP

① 水稻基因组全细胞染色体的分离 A.分离前水稻细胞,箭头所指为4号染色体 B.分离4号染色体后的细胞 A ②特定单条染色体的显微分离 A B A B 黑麦B-染色体(箭头所指)的显微分离 A. 分离前的核型(2n=14+2B) B. 分离出一条B-染色体后的核型 黑麦1R染色体的显微分离 ③染色体特定区的显微切割 A. 显微切割前的黑麦完整核型（箭头所示为B染色体） B. 显微切割后的核型（箭头所示为切除端粒片段的位置） A B 黑麦B染色体端粒区的显微切割 黑麦B染色体着丝粒区域微切过程 微切前 微切后 微操作机器人系统 微操作系统作为MEMS（微机械电气系统(Micro-Electro-Mechanical Systems）研究领域的一个重要分支受到各发达国家的高度重视，纷纷投入大量资金进行微操作机器人系统的研究，现已研制出多种各具特色的微操作机器人实验样机系统。 生物工程作为微操作机器人系统的主要应用领域。把生物工程作为微操作机器人的应用领域，目的可以解释为2点：①从应用层面说，目标相当明确地界定在“面向生物工程”上，如细胞操作、基因转移、染色体切割等，希望给下一世纪中国的“绿色革命”带来推动作用。②从技术层面说，定位在基于显微视觉全局闭环的计算机伺服自动协调作业上。长远观之，其相关技术与微加工、微电子、显微医学等可触类旁通。 系统的具体运作方式： 活体细胞或染色体悬浮在培养液内，左右微操作机器人对称地安装在显微镜机架上，毛细玻璃管与毛细玻璃针等操作工具作为机器人的末端执行器(毛细玻璃管用于捕捉与固定细胞，毛细玻璃针用于细胞的切割、注射等)。 哈工大纳米级微驱动及微操作机器人平台 纳米微操作机器人在10×10微米的基片上刻出的字样 3、扩增产物的原位杂交分析 利用荧光原位杂交技术可直接将某个区段的DNA直接定位在染色体上，进行PCR产物的鉴定。同时还可以将某个区段DNA定位到相关的其它植物染色体上，进行染色体“一对一”的杂交和进行单条染色体之间的比较作图研究。 黑麦A、B染色体着丝粒区DNA同源性的荧光原位杂交分析 黑麦A、B染色体端粒区同源性的 荧光原位杂交分析 玉米B染色体特异片段荧光原位杂交结果 A为中期染色体，B为间期细胞核 B480在玉米中期和间期细胞(2n=20+4B)中的 原位杂交定位 B1320在玉米中期和间期细胞(2n=20+6B)中的 原位杂交定位 4、单条染色体AFLP分子标记图谱分析 单条染色体AFLP分子标记图谱分析，可以直接获得任意一种植物特定染色体分子标记图谱，利用这些相同的DNA分子标记，在相关的物种之间进行遗传或物理作图，比较这些标记在不同物种基因组中的分布特点，揭示染色体或染色体片段上基因及排列顺序的相同或相似性，并由此对相关物种的基因结构和起源进行分析，为基因的克隆、基因组的比较研究、遗传图谱和物理图的构建提供一个新的方法。 洋葱染色体分裂相 分离前 分离后 单条染色体AFLP技术流程 染色体C1、C2扩增电泳结果 M： Marker A： 拟南芥基因组DNA N： 负对照 C1：染色体C1DNA C2：染色体C2DNA 从左至右依次为： 单条染色体AFLP技术存在的问题 单条染色体DNA模板含量较低，为扩增增添了不稳定因素 染色体标本制备及分离过程中可能会对DNA造成损伤 Thank you! 结束放映 * 第六章 染色体显微操作 染色体微分析技术包括：染色体显微切割、分离；PCR体外扩增；微克隆技术，染色体或特异区扩增产物间的Southern杂交及特异DNA片段的FISH定位。该项技术是近十多年来随分子生物学技术发展而诞生的一项生物高新技术，它既有细胞生物学的可视性，又有分子生物学的先进性，在染色体结构、基因组和比较基因组学、基因克隆、物理图谱构建等方面具有广泛的应用前景。 显微切割技术是在显微状态或显微镜直视下通过显微操作系统对欲选取的材料（组织,细胞群，细胞，细胞内组分或染色体区带等）进行切割分离并收集用于后续研究的技术。 显微切割技术实际上属于在微观领域对研究材料的分离收集技术，因此应用此技术往往是许多要深入的研究工作中起始的重要一步。 显微切割的特点 一是“细微”，显微切割的对象可以达到微米级，显微切割的精度可以达到毫微米级，因此利用显微切割