离子液体强化选择性酶促合成异槲皮苷工艺优化.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（３）：１３０１３４ 离子液体强化选择性酶促合成异槲皮苷工艺优化 １ １ １ １ １，２ 孙国霞 　王　俊 　丁伟桐 　王凯旋 　吴福安 （１江苏科技大学生物与化学工程学院　镇江　２１２０１８　２中国农业科学院蚕业研究所　镇江　２１２０１８） 摘要　为了提高离子液体共溶剂效应强化选择性酶促合成异槲皮苷的得率，在前期单因素实验 的基础上，利用响应曲面法对离子液体比例、酶浓度和底物浓度三因素进行优化。优化后的最佳 工艺条件为：离子液体比例１３．０５％、酶浓度９．１０ｇ／Ｌ、底物浓度０．７２ｇ／Ｌ，优化后异槲皮苷的摩 尔得率为９９．２７±０．５５％，较优化前提高了８．６０％。 关键词　离子液体　共溶剂　响应曲面法　酶促合成　异槲皮苷 中图分类号　Ｑ８１５ 　　异槲皮苷（ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ），即槲皮素３ＯＤ葡萄 β ［１］ ［２］ 糖苷（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３ｇｌｕｃｏｓｅ），具有抗氧化 、抗肿瘤 、 ［３］ ［４］ 降血压、降血脂 和抗抑郁 等生物活性。以异槲皮 苷 为 原 料 合 成 的 ＥＭＩＱ（ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ）是一种新型的多用途食品添加剂，具有优 质的抗氧化和着色特性，其安全性已获美国食品药品 ［５６］ 监督管理局的认证 。然而，异槲皮苷在自然界植物 图１　芦丁选择性酶促水解途径图 ［７］ 中的含量极低 ，直接提取难以制备。研究发现，在分 Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅｄｉａｇｒａｍｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃ 子结构上比异槲皮苷多一个鼠李糖基的芦丁在自然界 ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｆｒｏｍｒｕｔｉｎ 分布广泛、来源丰富，以其为原料经鼠李糖苷酶催化水 ［１１］ 解可选择性制备异槲皮苷（如图１所示）。因此，生物 等 发现脂肪酶 ＣＡＬＢ在［Ｅｍｉｍ］［ＢＦ］中催化葡萄 ４ 转化芦丁定向合成异槲皮苷的酶促水解工艺是今后规 糖的酯化反应具有很高的选择性。本课题组前期研究 ［８］ 发现，在缓冲溶液体系中底物芦丁的溶解性较差，导致 模化制备异槲皮苷的有效途径 。 　　近年来，重塑性强的离子液体通过组合不同的阴 橙皮苷酶的催化效率较低。之后，在缓冲体系中添加 一定比例的［Ｂｍｉｍ］［ＢＦ］形成共溶剂体系，有效地提 阳离子来促使酶适应反应底物的极性和疏水性，且提 ４ ［９］ 高了芦丁的溶解度（从０．０８ｇ／Ｌ提高到０．８０ｇ／Ｌ），提 高底物的溶解性和酶促反应速率 。如 半乳糖苷酶 β ［１２］ 高了糖苷酶的催化效率（摩尔得率可达９１．４１％） ， 催化Ｎ乙酰葡萄糖胺水解反应中，由于Ｎ乙酰