年产300吨硫酸链霉素生产线课程设计.docxVIP

硫酸链霉素的主要成分是链霉素。链霉素(Streptomycin)是瓦克斯曼 (Waksman S. A.)于 1944 年从灰色链霉菌(Streptomyces, griseus)培养液中 分离岀来的一种碱性抗生素。链霉素是一种相当强的有机碱，也是一种多糖类 化合物。其分子结构是由链霉肌、链霉糖和N-甲基-L-葡萄糖胺三部分以昔键 相联结而成的。链霉素碱稳定性特别差，工业产品主要是其硫酸盐形式，即硫 酸链霉素(Strcpto mycin Sulf ate) o 链霉素是氨基糖貳碱性化合物，它与结核杆菌菌体核糖核酸蛋白体蛋白质结合, 起到了干扰结核杆菌蛋白质合成的作用，从而杀灭或者抑制结核杆菌生长的作 用。由于链霉素肌肉注射的疼痛反应比较小，适宜临床使用，只要应用对象选 择得当，剂量又比较合适，大部分病人可以长期注射(一般2个月左右)。所以, 应用数十年来它仍是抗结核治疗中的主要用药。因此链霉素对结核杆菌有强大 抗菌作用，其最低抑菌浓度(MIC)—般为0.5 mg/Lo它对许多革兰氏阴性菌(G-) 如大肠杆菌、肺炎杆菌、肠杆菌属、沙门菌属、布鲁菌属等也具抗菌作用。链 霉素对革兰氏阳性菌(G+)抗菌活性较差。链霉素游离碱为白色粉末。大多数盐 类也是白色粉末或结晶，无嗅，味微苦。链霉素在中性溶液中能以三价阳离子 形式存在，所以可用离子交换法进行提取。其水溶液比较稳定，但其稳定性受 PII值和温度的影响较大。其硫酸盐的水溶液在P1I=4—7,室温下放置数星期， 仍很稳定，如在冰箱中保存三个月内活性无变化。目前抗生素的生产主要是利 用微牛物发酵来进行，少数釆用化学合成的方法，当然也有的釆用化学法或牛 化法半合成。对于链霉素可由灰色链霉菌发酵生产。双氢链霉素可由湿链霉菌 产生，但通常以半合成方法生产。一般认为链霉素是治疗结核杆菌感染的首选 药物，除此以外，还用于治疗革兰氏阴性菌所引起的泌尿道感染、结核性脑膜 炎，鼠疫，肠道感染，肺炎，败血症，百日咳等。链毒素的缺点是容易产生耐 药性；长期使用对第八对脑神经有毒害除了医用外，也有报道将链霉素用于农 牧业的。例我国新疆某生产建设兵团的农场自1985年起应用链霉素治疗菜类 瓜类和粮食等作物的病害，取得较好效果；链霉素还可用于猪肺炎，雏鸡口 痢疾、以及鸡，鸭，鹅的巴氏杆菌感染等的治疗。国内有些厂家将生产的链 霉素作为农用出口，效益较好。 硫酸链霉素工业盐即链霉素工业产品(原料药)，与链霉素相比，其生物活 性没有变化，只是在分离纯化工艺中使用了稀硫酸作为离子交换色谱柱的洗脱 液。因此使链霉素酸化，故而称为硫酸链霉素和链霉素相比，硫酸链霉素具有 化学性质更为稳定，保存期更长的优势，因此工业上常以生产硫酸链霉素为主。 1菌种的选育及制备 1?1菌种的选育 1.1.1菌种活化 取保存期一年内的灰色链霉菌菌株(Stre ptomycesg riseus)冷冻油管一支。 菌种由中国工业微生物菌种保藏中心提供，编号CICC 11002o用平板划线法将 菌种接种于培养基，进行活化，培养配方为：葡糖糖1%,蛋白腺0.2%,豌豆汁 (13粒/100ml ),氯化钠0. 25%,琼脂2%碳酸钙0.02%, PH调至7. 4； 30°C培 养8 Ho之后，进行观察：首先观察培养基内菌落菌落是否为为白色丰满的梅花形 和馒头形，背面为淡棕色色素菌落；之后，取少量进行涂片，简单染色后观察细胞 形态状况，排除形态异常菌落，于斜而固体培养基内传代作为种子使用,传代培 养基成分与活化培养基成分相同。 1.1.2孑包子生产 取上一步活化菌种斜面一支，进行种子子培养。产种子培养基成分为：酵母 浸膏2%,七水合硫酸镁0. 05%,磷酸氢二甲0. 05%,葡萄糖1%,氯化钠0. 5%, PH调至7.8。培养基灭菌后，于超净台内接种，接种孑包子的浓度按2.5%接入 100ml培养基,3 0°C、200rpm震荡培养48小时。 1?1?3摇瓶发酵 将种子按照6%浓度分别接种于5个三角瓶中的生产培养基中进行发酵实验。 培养基成分为：黄豆饼粉5%,玉米淀粉4%,硫酸钱0.6%,磷酸氢二钾1%。30°C、 20 Orpm震荡培养48小时，之后降温至28 °C,继续震荡培养96小时。 1.2HPLC法检测发酵产物含量 分别从5个三角瓶中各取1 OOul发酵液，过0.45 u ni孔径膜除去杂质，4摄 氏度保存备用。之后，称取0.05g标品，置于50ml容量瓶中，加0. lmol/L氢 氧化钠10ml, 60摄氏度水浴40m in。之后，各加入1 %硫酸铁鞍0. 5ml使之与 发酵液中的产物络合，之后超纯水定容，过0.45 Um膜除去杂质。 TM 色谱柱:选用 Symmetr yshield RP18 5柱（5 U m, 3. 9 in mX 150m