氨基酸纸上层析.pptVIP

氨基酸纸层析 氨基酸纸层析是氨基酸分离鉴定的一种简单方式。 是为了测定蛋白质的氨基酸组成或从蛋白质水解液中制取氨基酸，需要对氨基酸混合物进行分离。 实验目的 1、通过实验，了解氨基酸纸层析法的原理。 2、掌握氨基酸纸层析的操作方法 实验原理 层析：又称色谱（chromatography） 层析系统常常由2个相组成：固定相（静相）和流动相（动相）。混合物在层析系统的分离决定于该混合物的组分在这两相中的分配系数。 一种溶质在两种给定的互不相容的溶剂中分配时，在一定温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度比值。 分配系数 纸层析 用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法。 纸层析所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成。滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。 将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点不等的层析点 溶剂由下向上移动的，称为上行法；由上向下移动的，称下行法。 当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90°再用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向纸法。 氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。 方向、显色 Ｒf溶质在滤纸上的移动速率用