国家自然科学基金课题创新设计以及申请书撰写.pptVIP

* 1、候选miRNA在中枢神经系统发育过程中的表达。利用miRNA提取和反转录系统明确候选miRNA在不同胎龄小鼠的相关脑区的时空表达特征；利用LNA修饰的寡核苷酸探针进行原位杂交（Kloosterman, W.P. et al. 2006, Nat. Methods. 3, 27-29），在体检测候选miRNA在中枢神经系统内的时空表达情况。 2、候选miRNA对NSC增殖分化的调控作用。利用生物合成的miRNA mimics和inhibits分别转染神经细胞系细胞和培养的原代神经球（Sathyan, P. et al. 2007, J. Neurosci. 27, 8546-8557），初步观察候选miRNA对NSC增殖分化等生物学行为的影响；利用病毒感染体系构建含有EGFP的针对候选miRNA的过表达载体，以及反义序列的表达载体，感染原代培养的神经球，观察NSC增殖分化等细胞生物学行为的变化；用胚胎电转染的方法将上述过表达载体和反义载体转染至不同阶段小鼠胚胎的室管膜（下）带，结合NSC增殖分化相关的标记物的免疫荧光染色，用激光共聚焦显微镜观察被转染的NSC的变化。 研究内容： 3、候选miRNA调控NSC增殖分化的分子机制。首先探讨差异表达的miRNA与Notch信号的关系，主要研究这些差异miRNA是否是Notch信号途径的下游分子，包括其启动子区的生物信息学分析（RBP