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现代生物技术实验讲义
DNA重组分子的构建、转化、克隆和检测
蛋白质(多肽)在大肠杆菌中的大量表达
华东师范大学生命科学学院
SCHOOL OF LIFE SCIENCES , EAST
2008年9月
引 言
随着生物技术的发展,生物工程的专业技术人员的需求更为迫切,特别是生物技术已经渗透到各个行业,并已蓬勃发展。生物技术的发展不但要有深厚的理论基础,而且要求专业技术人员具有较强的动手能力,因为该学科是一门实践性较强的科学。在培养生物技术专业学生时要特别注意学生实验能力的培养,尤其是专业基本操作。
本专业学生的实验课程已经包括生物化学实验、微生物实验、基因工程实验、细胞工程实验和发酵工程实验等课程实验。这些实验为培养学生的基础操作能力、提高学生的实际动手能力等奠定了良好的基础,但是这些实验都是单个的小实验,各个实验各自为一体,没有系统地相互关联,学生完成实验后没有一个完整的概念。
本实验以基因工程、细胞工程和发酵工程实验为基础,组成了生物工程中上游、中游和下游技术。其中每一个部分放弃了原来单独小实验的结构,而改为一个独立的大实验,增加了学生的设计性和主动性。这些实验既注重和加强了原来各自的实验内容,又注意到相互联系。
本讲义分为三个部分,第一部分“DNA重组技术与基因检测芯片技术”;第二部分“动物细胞培养及细胞活性检测技术”;第三部分“发酵工程及分离提取技术”。这些实验采取大实验方法,使学生有一个完整的操作过程,对理解生物工程的上游、中游和下游技术有了感性认识。
目 录
前 言………………………………………………………………………………………………3
1. DNA重组技术的基本原理………………...…………………………………………………4
2. 实验目的和要求…………………………………………………………………………….…6
3. 实验材料和仪器 …………………………………………………………………………….…6
3.1 实验材料 ………………………………………………………………………………….…8
3.2 主要仪器设备 …………………………………………………………………………….…8
3.3 实验器皿……………………………………………………………………………………...8
3.4 细菌培养基…………………………………………………………………………………...8
3.5 分子生物学试剂……………………………………………………………………………...8
3.6 SDS电泳试剂…………………………………………………………………………9
4. 实验内容………………………………………………………………………….……………10
5. 思考题……………………………………………………………………………………….…12
6. 参考资源…………………………………………………………………………………….…12
6.1参考书目………………………………………………………………………………………12
6.2 参考产品目录………………………………………………………………………………...13
6.3 参考网站……………………………………………………………………………………...13
附录一 质粒DNA的提取………………………………………………………………………14
附录二 琼脂糖凝胶电泳…………………………………………………………….………….15
附录三 DNA的纯度、浓度的测定…………………………………………………………….17
附录四 DNA的酶切和连接(体外重组)…………………………………………………….18
附录五 大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA分子的转化………………………………19
附录六 重组转化子DNA的鉴定(篮白斑筛选法)…………………………………………21
附录七 重组转化子DNA的鉴定(限制性内切酶分析法)…………………………………22
附录八 DNA的体外扩增(PCR技术)………………………………………………………23
附录九 SDS-PAGE电泳………………………………………………………………………25
前 言
二十一世纪是生物学的世纪,分子生物学作为生物学最前沿的基础学科是生物学类专业通向生物高技术的必修课程。随着人们在分子生物学水平上的研究和学习的深入和广泛展开,除了在分子水平上了解生物学的本质特征外,在分子水平如何进行生物学操作是生物学界共同关心并十分重视的问题。“DNA重组技术”就是利用分子生物学的一般原理阐述在分子生物学实验中所涉及的技术方法、原理和策略,是一门指导分子生物学实验操作的理论与实践相结合的课
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