第二次课程－食物中之胆固醇定量.pptVIP

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2019-07-02 发布于天津
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第二次课程－食物中之胆固醇定量.ppt

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第二次程食物中之固醇定量原理利用酵素反法使品中的及反後成及而所生成之藉由的作用生成可於下其生成量其反式如下品步及於水浴下分再分於下量其吸光值所得之吸光值入公式算後可得知品之固醇含量算公式

第二次實驗課程－食物中之膽固醇定量實驗原理利用酵素反應法使樣品中的 cholesterol ester 經 cholesterol esterase 及cholesterol oxidase 反應後變成4-cholesten-3-one 及 H2O2，而所生成之 H2O2 會與4-amino-antipyrine 藉由 peroxidase 的作用生成red quinone，可於500nm下測其生成量。其反應式如下: cholesterol ester＋H2O ------------------- cholesterol＋fatty acid cholesterol esterase cholesterol oxidase cholesterol＋O2 ------------------------4 quinone＋4 H2O-cholesten-3-one＋H2O2 H2O2＋phenol＋4-amino-antipyrine ---------------red peroxidase 實驗藥品 Calibrator (standard) 200mg/dl Working reagents: PIPES buffer pH6.9 40 mmol/l Phenol 24 mmol/l Peroxidase 100 U/l Cholesterol esterase 250 U/l Cholesterol oxidase 200 U/l 4-amino-antipyrine(4-AA) 0.05 mmol/l 實驗步驟將A、B及C於水浴37℃下5分鐘，再分別於500 nm下測量其吸光值。所得之個別吸光值帶入公式計算後，可得知樣品之膽固醇含量（mg/dl） A B C Reagent blank (μl) Standard (μl) Sample (μl) DH2O 10 - - Standard - 10 - Sample - - 10 Reagent 1000 1000 1000 計算公式 OD of unknown Conc. of unknown＝---------------------- × Conc. standard OD of standard