苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究-中国生物防治学报.pdf

18 ( 1) 17 - 20 　　　　　　　　中国生物防治 　Chinese Journal of Biological Control 　　　　　　　2002 年 2 月 苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究 余健秀 , 汤慕瑾 , 徐建敏 , 庞 义 ( 中山大学生物防治国家重点实验室/ 昆虫学研究所 , 广州 　5 10275) 摘要 : 利用 10L 全自动发酵罐对苏云金杆菌小试生产的发酵条件进行了研究 。结果显示 ,不同的 温度 、p H 值 、培养基成分及接种方式对发酵产量和发酵周期均有影响;在培养基配方中存在葡萄糖 时 ,葡萄糖单独灭菌对提高苏云金杆菌发酵产量是重要的。初步生物测定显示 ,发酵上清中存在一 些杀虫增效因子 ,建议配制苏云金杆菌制剂时尽可能加以利用 。 关 　键 　词 : 苏云金杆菌 ; 发酵 ; 增效因子 + ( ) 中图分类号 : S476 . 11 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 1005926 1 2002 0 100 1704 ( ) 苏云金杆菌 B acil l us t h u ri ng iens is , Bt 由于其新种易被分离 、营养条件要求不高和应用广泛 等原因 ,很早就被科学工作者所重视 ,并已转化为商品制剂用于害虫防治 。随着各种商品制剂的不 3 3 断出现 ,发酵效价已从 80 年代初的2000 ×10 IU/ ml 达到 3000 ×10 IU/ ml ,发酵罐容积在 1987 年 已达 200t [ 1 ] 。至今 ,Bt 已是 目前世界上产量最大的微生物杀虫剂 。本研究利用德国产的 10L 全 自 动控制发酵罐 ,研究小试生产发酵中的温度 、p H 值变化 、接种方式 、培养基成分对 Bt 发酵的影响 , 以及发酵上清液对产品毒力的增效作用 ,为下一步的Bt 中试生产或工业化生产提供参考 。 1 　材料与方法 11 　菌株和供试昆虫 苏云金杆菌 Bt a 分离 自美 国汽 巴嘉基 公司 的工业 菌粉 , 含 cry 1Ca 基 因 , 对斜纹夜蛾 ( Sp odop tera l it u ra) 幼虫有毒杀作用 。斜纹夜蛾幼虫为本所养虫室人工饲养的健康种群 。 12 　培养基 ( ) PM 培养基 g/ L :蛋白胨 10g ,葡萄糖 5g ,酵母膏 2g , KH PO 1g ,FeSO ·7 H O 002g ,Zn SO · 2 4 4 2 4 7 H O 002g ,Mn SO ·7 H O 002g ,MgSO ·7 H O 03g ,p H70 ;改良PM 培养基 :PM 培养基中加入 2 4 2 4 2 ( ) ( ) CaCO 1g/ L ,p H70 ;A 培养基 g/ L :黄豆粉 25g ,淀粉 10g ,葡萄糖 10g , KH PO 1g , K HPO 1g , 3 2 4 2 4 FeSO ·7 H O 002g ,CaCO 1g ,p H70 。 4 2 3 1. 3 　芽孢接种法 配制固体 PM 培养基 ,冷至 50 ℃左右时倒平板 ,置 37 ℃培养