IPP 分析免疫组化图片.pptxVIP

用Image-Pro? Plus ( IPP ) 分析免疫组化图片 ;1.免疫组化图片分析原理;1.1光密度与灰度—迷惑人的不同概念;Gray: between white and black;Optical Density:吸光物质的光学密度.;用OD值是正确的;处理照片时用的却是灰度;用标准样品才能把OD值与样品量关联到一起;1.2定量分析的指标：IOD ( Integrated option density )与Mean Density;1.3比较两张照片的染色物质量的差别;比较两张照片的染色物质量的差别;这回该怎么看？;比较体积！;1.4 实际图片的情况很复杂的。;直接比较整张图片的IOD等于在比较整张图片的mean density;哪一个染色物更多？;使用不同的area会得到不同的结论要结合切片情况来判断。;对整张图片区域进行平均的情况比较少，这张图片中黄色的IOD值主要来自于中间一块区域内。;右上角的空白区面积应该扣除。;也许应是这个特定的组织区域;这个区域是特定染色的区域。在计算IOD时能同时计算出来，但以此为平均面积往往并不正确。;对单个细胞的分析比较;边界不清晰的贴壁细胞;细胞簇的分析;2.从图片上分析光密度方法 的技术进步;2.1测定整张照片的光密度-图象分析仪;2.2 抽样测量光密度;2.3 ImagePro plus的独特优势。;使用IPP比前两种方法更好。;3.用IPP分析免疫组化图片的过程;3.1用于免疫组化半定量分析的照片拍摄;显微镜光源;固定显微镜的工作条件;必须使用手动控制曝光的相机;控制相机曝光时间;背景的影响;较暗的背景值对分析结果的影响;扣背景后依然没有显著性差异;不能使用相机的自动白平衡;最好使用专业CCD拍摄;应当把照片存为无损压缩格式TIFF;总结拍摄注意事项：;3.2用Image-pro plus分析免疫组化图片;3.2.1开始使用IPP;;将分析图片信息保存到数据库中;3.2.2进行光密度值较正。;光密度值校正;正规的光密度值较正;3.2.3选择测量参数及分析指标;;3.2.4选取特定的待测对象(Objects);用IPP选取特定颜色区域;Irregular AOI工具是手动工具。A:trace方式,手动或自动寻找区域边界;B：Magic wand方式,定义一片特定灰度范围的区域。;Segmentation工具：完全按照颜色标准来选取多个相同颜色的区域;3.2.5测量并导出统计结果数据;测量??标：;3.2.6记录宏操作;3.3免疫组化照片测量结果的统计分析;结语