Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法.docVIP

Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法 我们所使用的是Chemicon公司的ECM554,基质胶已经包被好了,买来就可以用,很方便,而且我们算过,跟自己买胶来包被价格相差不大。这种胶4度下很软,37度则变得比较坚硬,因此用前应先放在培养箱中10分钟作用,使胶完全凝固。 该试剂盒对穿过膜的细胞进行荧光染色,再用裂解液裂解细胞后检测荧光值。我们在实际使用的时候对穿过膜的细胞采用1%结晶紫染色,镜下计数细胞数目。结晶紫也可以用33%醋酸溶解,再用酶标仪570nm检测,同样可以反应穿过细胞数 因为基质胶的厚度直接影响穿过膜的细胞数,因此建议有条件的话还是买这类已经铺好胶的试剂盒,比较可靠。 说明书该公司网上可以下载,对原理也有比较详细的阐述,可以去查一下。 我们做的时候,上室用0.5%BSA的培养液,下室用5%血清的培养液,下室血清的浓度可根据细胞类型的不同进行调整,如果细胞侵袭能力强,可适当降低血清浓度,否则可适当提高血清浓度。 需要注意的是: 1。上室内的细胞数目要适当,过多,穿过膜的细胞会过多过快,如果用计数法的话将难以计数;最少也要保证在收样的时候,上室内还要有细胞存在。具体细胞密度需要自己摸索。 2。细胞计数的准确性对结果影响很大,各组间最好不要分开计数。尽量用同一密度的细胞悬液给予不同处理,保证各组细胞量一致 3。对细胞的处理不可影响细胞生存。否则难以肯定是细胞量的改变