蛋白互作研究方法.pptVIP

The MagneGST. Pull-Down System Figure 1. Overview of the MagneGST. Pull-Down System protocol. P = Prey Protein, M = MagneGST. Particle. 5 免疫共沉淀Co-IP 6 Far-western analysis 双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation，BiFC) 分析技术，利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP) 及其突变体(YFP,CFP,BFP)的特性作为报告基因，将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白连接. 如果两个目标蛋白因为有相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成活性的荧光基团而发出荧光. 在荧光显微镜下，就能直接观察到两目标蛋白是否具有相互作用，并且在最接近活细胞生理状态的条件下观察到其相互作用发生的时间、位置、强弱、所形成蛋白质复合体的稳定性，以及细胞信号分子对其相互作用的影响等，这些信息对研究蛋白质相互作用有一定意义。 7 双分子荧光互补技术 BiFC Principle of the BiFC assay GFP的特性 绿色荧光蛋白(GFP) 来源于水母(Aequorea v