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表观遗传学系列实验之 Chromatin Immunoprecipitation （ChIP ） Content 1、ChIP 简介 ChIP 原理、类型 2 、ChIP 应用 3、Experiments ChIP 原理 利用抗原抗体特异结合的性质，从细胞 裂解物中分离目标蛋白-DNA 复合体，研究蛋白-DNA相互作用的技术。 ChIP 类型 ChIP with Native Chromatin: Advantages and Problems Relative to Methods Using Cross-Linked Material，B Turner - ‎2001 ChIP 应用 转录因子与DNA的动态关系以及组蛋白修饰对基因表达的调控作用等。 技术流程 DAY1: 收细胞，孵育抗体（overnight ） DAY2: 洗脱，解交联（overnight ） DAY3：DNA 片段回收 实验步骤及注意事项 1. 细胞固定与裂解 1、准备一盘150mm培养皿培养的细胞，生长80 －90 ％满，除去培养 注意事项： 基。 1、不同细胞可能会用不同的固 2、加入新鲜配制的1％甲醛PBS溶液5mL室温固定10min，除去甲醛溶 定条件，如果下一步超声无法将 液，加入新鲜配置的1 ×甘氨酸（0.125M ）PBS溶液5mL，室温5min 。 DNA超到小于1000bp，应减少甲 醛浓度或者降低固定的温度，如 3、除去甘氨酸溶液，用PBS洗一次，将细胞收集到离心管中，4 ℃， 4 ℃固定； 800g离心细胞3min （细胞固定后可能会不太容易离心下来，如有必要 2、固定完成后所有操作应在冰 可加大离心转速）除掉PBS溶液。（细胞可在－80℃冻存） 上进行； Cell lysis buffer （细胞裂解液）： 4 、加入1mL含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解液，吹打均匀，放在冰上 10mM HEPES, pH7.9, 0.5% IGEPAL- 15min，每5min涡旋一次。 CA630,1.5mM MgCl2, 10mM KCl Nuclear lysis buffer （核裂解液）： 5、4 ℃，800g离心细胞3min，除去上清，加入500mL含有蛋白酶抑制 50mM Tris, pH 8.1, 10mM EDTA, 剂的核裂解液。 0.3% SDS 实验步骤及注意事项 2. 核裂解液超声片段化 注意事项： 1、第一次做超声应摸一下超声条件：将上述核裂解液放入超声仪中， 超声必须在冰水混合物中进行 超声仪条件为：30s on，30s off 。