原子力显微镜检测技术atomicforcemicroscopeAFM同位素标记.ppt

蛋白质芯片技术及其应用 董建桐 201000111016 2010级化学基地 Protein chip(microarray) Contents 一、概况 一、概况 一、概况 蛋白质芯片( protein chip) 是指以蛋白质分子作为配基, 将其固定在固相载体的表面, 形成 的蛋白质微阵列( protein microarray) [1]。 最早进行蛋白质芯片研究的 是德国科学家Lueking[2,3] 一、概况 采用原位合成、机械点样或者共价结合等方法将多肽、蛋白 质、酶、抗原、抗体固定于硅片、玻璃片、塑料片、凝胶、尼 龙膜等固相介质上形成生物分子点阵[4]； 一、概况 待分析样品中的生物分子与蛋白质芯片的探针分子发生杂交 或相互作用； 一、概况 利用激光共聚焦显微扫描仪等对杂交信号进行高通量检测和分析。 一、概况 蛋白质芯片的分类[7,8] 一、概况 蛋白质芯片的特点 敏感性高 通量高 重复性好 应用性强 特异性强 一、概况 Hall, Ptacek, Snyder 2007 Mech Ageing Dev. 128: 161-167 二、制备与检测 二、制备与检测 1.载体的选择[8] 载体应满足以下要求： 1)表面有活性基团; 2) 探针固定后能保持蛋白质活性; 3)使单位载体上结合的蛋白分子达到最佳容量; 4)具有良好的生物兼容性; 5)载体惰性, 有足够的稳定性； 6) 均一性好。 二、制备与检测 2.蛋白质的固定方式[9,10] 1）扩散 2）物理吸附 3）共价连接 4）亲和捕获 二、制备与检测 3.芯片的封阻[11] 所用的试剂主要有BSA （牛血清白蛋白）和Gly 两种。 封阻后, 用PBST ( 含0. 1% Tw een 20 的PBS) 反复洗涤芯 片, 将多余的封阻剂洗去。 4.标记法的信号扩大[5,10]： ①生物素－ 亲和素放大法 ②纳米金－ 银增强方法 ③滚环扩增放大法( rolling-circle amplification， RCA) 探针标记检测法 非标记检测法 表面增强激光解吸离子化技术 (Surface enhanced laser desorption/ionization, SELDI) 表面等离子体共振检测技术（surface plasmon resonance, SPR） 原子力显微镜检测技术 （atomic force microscope, AFM ） 同位素标记检测 荧光标记检测 化学发光检测 酶免疫标记检测 胶体金标记检测 三、蛋白质芯片的应用[7,8] 三、蛋白质芯片的应用 1.抗体芯片 蛋白表达谱 磷酸化水平改变 蛋白质间相互作用 2.基于蛋白质芯片的肿瘤血清生物标识物发现的原理 3. 应用蛋白质芯片在人血清中发现肾癌差异蛋白 四、前景与发展 四、前景与发展 特异性更强 样品准备和标记操作大为简化 成像与数据分析一体化 检测数据的标准化 快速、廉价、高通量、规模生产 参考文献 [1] 胡洁, 朱有名. 蛋白质芯片技术在蛋白质组研究领域的应用[J]. 国外医学临床生物化学与检验学分册, 2004,5, 25(3):223-225. [2] Frears ER,Stephens DJ,Waiters CE, et al. The role of cholesterol in the biosynthesis of β-amyloid[J]. Neuroreport, 1999,10(8): 1699–1705. [3] Lucking A, Horn M, Eickho H, et al. Protein microarrays for gene expression and antibody screening[J].Analy Biochem,1999, 270: 103–111. [4] Xiao H. Research in Protein chip and Its Application[J]. Journal of Linyi Normal University, 2007,6, 29(3):49-54. [5] Sha SHA, ZHENG Xiao-dong*. Progress of Protein Chip Construction Technology[J]. Current Biotechnology, 2011, 1(5):312-317. [6] Jinghui C H Y. Progr ess on Protein Microar r ay Technique[J]. BIOTECHNOLOGY BULLETIN, 2006(5):54-57.