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HIV/AIDS免疫异常激活和其和疾病进展相关性探究 ［摘要］目的：分析我国艾滋病患者的免疫异常激 活水平及其与CD4+T细胞计数、疾病进展的相关性，探讨免 疫异常激活在HIV/AIDS发病中的作用。方法：通过检测287 例不同病情的未接受过任何治疗的HIV/AIDS患者外周血 CD4+T细胞计数，免疫异常激活标志物及血浆病毒载量，对 相关数据进行相关性分析。结果：不同疾病进展阶段的 HIV/AIDS患者免疫异常激活水平显著不同，随着疾病进展， 免疫异常激活水平显著升高。且外周血CD4+T细胞计数与免 疫异常激活标志物呈显著的负相关。结论：感染HIV后诱导 的免疫异常激活可能是导致CD4+T细胞计数逐渐降低及疾病 进展的机制之一。 ［关键词］HIV； AIDS；免疫异常激活；疾病进展；相关 性 HIV介导的直接杀伤作用曾被认为是CD4+T细胞减少的 主要原因［1］。但研究发现，单单高HIV病毒载量似乎并不 足以导致病情加重及疾病进展。有研究表明，在HIV/AIDS 中，外周血中实际被HIV病毒感染的CD4+T细胞数量很低， 绝大多数死亡的CD4+T细胞是未被病毒感染的细胞［2］。这 说明HIV的直接杀伤并不能解释CD4+T细胞的迅速减少。因 此，在艾滋病发病及进展过程中，可能有其他机制的参与。 艾滋病中的慢性免疫激活现象是Ascher和Sheppard首先提 出的[3],感染HIV病毒后，HIV抗原的持续刺激使机体免疫 系统处于异常增高的激活状态，这种慢性的异常激活，是艾 滋病的重要特征，也是HIV相关的免疫缺陷的原动力。目前, HIV/AIDS中的免疫激活现象国外研究较多，国内HIV/AIDS 患者的免疫激活状态如何及其与疾病进展的关系报道较少。 本研究拟通过检测287例不同病情的未接受过任何治疗的 HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞计数，免疫异常激活标志物 及血浆病毒载量，分析我国艾滋病患者的免疫异常激活水平 及其与CD4+T细胞计数、疾病进展的相关性，探讨免疫异常 激活在HIV/AIDS发病中的作用。 1材料 1. 1研究对象287例未接受过抗病毒治疗的HIV/AIDS 患者，均来源于云南省文山州中医医院、云南省传染病医院 /关爱中心、广西瑞康医院、广西柳州龙潭医院、湖北中医 药大学临床医学院、遵义医学院附属医院，所有入选病例均 为HIV抗体阳性，经Western Blot确认试验证实。排除孕 妇、合并有自身性免疫性疾病的患者及肝肾功能异常者。另 选取性别、年龄相匹配的40例HIV抗体阴性健康鲜血员为 对照组，均为来源于广安门医院的工作人员，所有受试者均 于采血前签署知情同意书。 1.2主要仪器FACS Calibur流式细胞仪（美国BD公司） 及System 340 bDNA Analyzer病毒载量分析仪（德国Bayer） 等。 1.3 主 要试剂 CD3/CD8/CD45/CD4 , CD8/CD38/CD3/HLA-DR, IgGl/IgGl/CD3/IgG 等四色荧光抗体 （美国BD公司）；FACS Lysing Solution （溶血素）（美国 ED 公司）；HIV-1 RNA 3. 0 Assay 试剂盒（德国 Bayer 公司）。 2方法 2. 1标本采集及PBMCs的分离 含有EDTA抗凝剂的5mL 真空采血管采集静脉血2mL,然后轻轻颠倒抗凝管8次，使 血液与抗凝剂充分混匀，防止血液凝固。在4 °C保存和运输 样品，在6 h之内送达检测实验室进行处理，24 h之内完成 检测。 2.2外周血淋巴细胞计数检测绝对计数：取新鲜全血 50 nL ,放入专用的CD4+T绝对计数管中，加入 CD3-FITC/CD4PE/CD8Percp抗体，混匀后，室温避光孵育15 min,加入450 uL免洗溶血素，充分混匀，室温避光15 min 后上机，采用Multi SET软件自动计数系统检测CD4+T细胞 及CD8T细胞绝对计数。 相对计数：于流式上样管中加入相应抗体各20 uL,取 100 PL全血加入到相应的试管中，不要碰到管壁（若碰到 管壁，须用棉签擦干净）。涡旋混匀，室温避光放置20 mino 取出试管，每管加入1倍稀释的FACS Lysing Solution 2 mL, 轻轻混匀（低速，3 s）,避光10 mino待管内液体透亮。然 后1 200 r ? min-1,离心5 min,弃去上清液。每管加入2mL 的PBS,轻轻混匀（低速,3 s）, 1 200 r ? min-1,离心5 min, 弃去上清液。加入0. 5 mL PBS混匀，4匸避光，lh内使用 BD Cellquest Pro软件获取样本，上机前应充分混匀。使用 BD Cellquest Pro软件分析获取的样本，以CD3+/SS