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全内反射 TIRFM Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy 1.1 Scheme of TIRF 1.4 Features of TIRFM Lower background Higher resolution Higher S/N ratio Photobleaching and phototoxicity are greatly reduced SRIC （Surface Reflection Interference Contrast） 2.3 Principle of TIRF 3.4 Combination of TIRFM with other technology 思考题 为什么要发展单分子分析方法？并举例具体说明。 为什么全内反射技术可以用于单分子分析？如果棱镜、显微镜头等光学元件表面有缺陷，会造成什么问题？ 一些贵金纳米颗粒（纳米簇除外）没有荧光，如何在单颗粒水平上观察其行为？ 1.2 Practical picture of the instrument Laser Stage incubation system Mercury Lamp Bright field Microscope EMCCD Different side elevation EMCCD 1.3.1 Prism-based TIRFM 1.3 Patterns of TIRFM 1.3.2 Objective-based TIRFM Common fluorescence TIRF SRIC MDCK Ⅰ. Judge the condition of cell adhesion beforeusing TIRF to make sure that the image is the best; Ⅱ. Analyse the cell surface conformation Unique SRIC 1.5 EMCCD Total Reflection Evanescent field?100nm high refractive index (such as glass)n1 low refractive index (water or buffer)n2 critical angle Part 2 Principle 2.1 Principle of TIR Condition of TIR ①n1. n2 ; ②Incidence angle Critical angle 2.2 Principle of Evanescent Wave 2.4 Principle of SRIC water cell glass Part 3 Application Single molecule detection/imaging; Protein-protein interaction; Enzymatic reactions; Photophysical properties of fluorophores …… TIRF Microscopy is ideally suited to studies of surface based molecular-cellular and molecular-molecular interactions Single Molecule Interface Cell endo- and exocytosis; Cell adhesion; cell division …… Molecular adsorption; Interactions at the solid Liquid Interface; Membrane trafficking …… Combination with other technology AFM, SPR, Microfluidic system …… Chem. Eur. J. 2000, 6, 1087-1092 Chem. Eur. J. 2003, 9,5686-5692 3.1 Study of single molecule BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS 235, 47–53 (1997) Biophys. J. 76 (1999) 709 Nature Cell Biology ,2,168-172 Biophys J 88: 3720–3730 (2005) NATURE CHEMICAL BIOLOGY VOLUME 3 NUMBER 2 FE
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