时间分辨荧光免疫分析方法的光谱研究解读.docVIP

第24卷, 第5期　　　　　　　　　　　　光谱学与光谱分析2004年5月　　　　　　　　　　　　Spectroscopy and S pectral Analysis Vol 124,No 15,pp5962599 May , 2004　 时间分辨荧光免疫分析方法的光谱研究 郭周义, 田　振, 贾雅丽 华南师范大学激光生命科学研究所, 广东广州　510631 摘　要　时间分辨荧光免疫分析法是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物, 标记蛋白质、激素、抗体、核 酸探针或生物活性细胞, 待反应体系(如:抗原抗体免疫反应、生物素亲合反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等 发生后, 用时间分辨荧光技术测定反应体系中分析物的浓度, 的。它之所以能够继放射性同位素标记、酶标记、化学发光、更灵敏的检测方法, 3+ 命荧光团Eu 螯合物的光谱研究结果, :336～337nm 3+ 的激发波长, 有利于Eu 主题词　免疫分析; ; Eu 3+螯合物中图分类号:A　　　文章编号:100020593(2004 0520596204 111　f —f 跃迁光谱 引　言 　　最近几年发展起来的时间分辨荧光免疫分析方法(TR 2 FIA 是超微量免疫检定法的一大突破。由于使用了时间分辨光谱技术和荧光增强技术, 使荧光免疫分析的灵敏度得到了极大提高。1983年Petterson [1]和Eskola [2]首先将时间分辨荧光光谱技术应用于免疫分析的研究中。目前, TRFIA 的最低检出值已达10-19mol ?well -1, 远远超过酶标记免疫分析法(EIA 的10-9mol ?well -1, 放射免疫分析法(RIA 的10-15mol ?well -1和发光免疫分析法(L IA 的10-15mol ?L -1。 稀土离子是金属离子, 若用来直接标记抗原、抗体, 标记率很低, 一般使用含有双功能基团的螯合剂, 形成稀土离子2螯合剂2抗原(或抗体 的螯合物。稀土离子的荧光, 不仅与自身的能级结构有关, 而且与螯合剂的性质有关。螯合物不同, 稀土离子的激发光和发射光也会有所不同。 指f n 组态内, 不同J 能级间跃迁所产生的光谱。它的特点是: (1 发光弱。这主要是因为f —f 跃迁是宇称选择规则禁 1　稀土离子的吸收光谱 　　镧系离子的电子排布为 2 1s 2s 22p 63s 23p 63d 104s 24p 64d 104f n 5s 25p 6(n =0～14 , 其主要价态有二价、三价和四价。三价态是特征氧化态, 其 n 基组态是4f (n =0～14 , 下一个激发态是4f n -15d [3]。 稀土离子吸收光谱[4]的产生可归因于三种情况。　收稿日期:2003203226, 修订日期:2003206228 阻的。虽然在溶液和固态化合物中, 由于配体场微扰, 也能 观察到相应的光谱, 但相对于d —d 跃迁来说, 也是相当弱的。 (2 类线性的光谱。谱带的尖锐原因是处于内层的4f 电子受到5s 2, 5p 6电子的屏蔽, 受环境的影响较小。 (3 谱带的范围较广。在近紫外, 可见区和近红外区内 的光谱。都能得到稀土离子(Ⅲ 112　f —d 跃迁光谱 4f n 向4f n -15d 的跃迁是组态间的跃迁。这种跃迁是宇称选择规则允许的, 因而4f —5d 的跃迁是较强的; 三价离子的吸收带一般在紫外区出现; 由于5d 能级易受周围离子的配体场影响, 相对于f —f 跃迁来说, 谱带变宽。113　电荷跃迁光谱 稀土离子的电荷跃迁光谱, 是指配体向金属发生电荷跃迁而产生的光谱, 是电荷密度从配体的分子轨道向金属离子轨道进行重新分配的结果。镧系络合物能否出现电荷跃迁带 取决于配体和金属离子的氧化还原性。一般在易氧化的配体 3+3+ 和易还原为低价离子(Sm , Eu , Te 3+, Yb 3+和Ce 4+ 的络合物光谱中易见到电荷跃迁带。谱带的特点是有较强的强度和较宽的宽度。 　基金项目:广东省科技攻关重点项目(2002C60113 ; 广州市天河区科技计划项目(2002XGP06 ; 广东省自然科学基金项目(No 1015012, No. 031518 ; 教育部科学技术研究重点项目(No 102113 资助 　作者简介:郭周义, 1965年生, 华南师范大学激光生命科学研究所教授, 博士生导师 301, 23415, 292, 189nm 。 2　稀土离子的荧光性能 211　稀土的荧光光谱 在紫外线等高能射线的激发下, 处在溶液或化合物中的三价稀土离子被激发, 从基态跃迁到激发态, 然后再从激发态返回到能量较低的能态时, 放出辐射能而发光, 这种光即为荧光。稀土离子的荧光光谱也像吸收光谱一样, 来自三个方面的跃迁:f —