第十二单元:移植免疫学检测.pptxVIP

第十二单元;实验一 HLA微量淋巴细胞毒试验 ; 微量淋巴细胞毒试验（Microcytotoxicity assay）是在经典的补体依赖的淋巴细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity，CDC）基础上发展而来的一项实验技术，目前已经广泛应用于器官移植供、受者间的交叉配型、复发性流产的封闭抗体检测等多个领域。在器官移植的文献中提及的CDC法多指微量淋巴细胞毒法。;器械 微量淋巴细胞毒反应板（泰萨奇板）、倒置荧光显微镜、 微量移液器、吸管、温箱、离心机、磁架等 。 试剂 淋巴细胞分离液(Ficoll, γ＝1.077)、T/B淋巴细胞分离磁珠及洗涤液、冻干补体、荧光染色液、供者全血2~3ml（EDTA或ACD抗凝）、受者血清2ml、阴性对照血清（可用1640培养液或PBS替代）、阳性对照血清（抗全淋 巴细胞抗体ALG/ATG）。;淋巴细胞的分离（Ficoll法）： 1. 将供者全血用PBS(pH7.4)缓冲液 按1:1稀释，混匀备用； 2. 取15ml离心管一支，加入一定体积的Ficoll液，用吸取稀释后的供者全血，沿试管壁缓慢加入，使全血置于Ficoll上层。Ficoll液与稀释后的全血体积之比为1:2； 3. 1500~2000rpm