第12章 核酸代谢.pptxVIP

第12章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 第一节 核酸的酶促降解 第二节 核苷酸的分解代谢 第三节 核苷酸的生物合成;核苷;核苷酸是DNA和RNA的前体, 是细胞内化学能流通领域中的载体（ATP， GTP）, 是NAD、FAD和 CoA等的重要成份。 在糖代谢中也有重要作用，如生成UDPG等。cAMP还是第二信使。;一、核酸酶 生物体内存在着多种降解核酸的酶类，称为核酸酶，它在核酸降解和周转中起着重要作用。酶稳定、耐高温 分类 底物：脱氧核糖核酸酶(DNase)， 核糖核酸酶(RNase) 作用方式：核酸外切酶（exonuclease） 核酸内切酶（endonuclease）;水解方向：3’?5’或5’ ? 3’ 产物：3’-磷酸产物或5’-磷酸产物 特异性:能否识别作用位点或二酯键两侧的碱基 具有位点识别专一性的内切酶称限制性内切酶。 ;核酸外切酶 核酸外切酶作用于核酸链的一端，逐个水解下核苷酸，是非特异性的磷酸二酯酶。;如蛇毒磷酸二酯酶是从DNA或RNA的游离3?-羟基端开始，逐个水解下5?-核苷酸；牛脾磷酸二酯酶则从游离5?-羟基端开始，逐个水解下3?-核苷酸。;2 核酸内切酶 核酸内切酶特异地水解多核苷酸内部各键，是特异性强的磷酸二酯酶。 如牛胰核酸酶作用于嘧啶核苷酸的磷酸二酯键，生成嘧啶核苷-3?-磷酸或末端为嘧啶核苷-3?-磷酸的寡核苷酸。;牛胰核酸酶专一作用于RNA，对DNA及其它磷酸二酯化合物不作用或作用活性很低。 牛胰RNase具有高度热稳定性。许多RNAase也都是如此。牛胰RNase (RNase Ⅰ)是最早分离纯化并结晶的第一个RNase，由124个氨基酸组成。;1957年在曲霉中分离提纯出RNaseT1，由105个氨基酸组成。专一水解鸟苷酸二酯键，产生3?-GMP或以3?-GMP为末端的寡核苷酸。类似的RNase从多种真菌中分离得到。;二、 脱氧核糖核酸酶 脱氧核糖核酸酶专一水解DNA， 作用方式:作为内切酶，可切断双链或单链; 作为外切酶有5?→3?切割或3?→5?切割。;;※三、 限制性内切酶（P479） 1979年，W. Arber, H. Smith和D. Nathans等发现某些细菌细胞内存在一类能识别一定序列并水解外源双链DNA的核酸内切酶。 细菌中产生的这类具有识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶统称为限制性核酸内切酶或限制酶，是DNA分子操作中必不可少的工具酶。 ;细菌除具有限制酶外，还具有一种对自身DNA起修饰作用的甲基化酶。一种限制酶和其相应的修饰酶对底物DNA的识别和作用的部位是相同的。修饰酶使该部位上的碱基甲基化，从而使限制酶对这种修饰过的DNA不再起作用。;在细胞中，限制性核酸内切酶可降解外源侵入的DNA，但不降解经修饰酶甲基化保护的自身DNA。 限制酶具有很强的专一性。它们对底物DNA有特异的识别位点(或称识别序列)。这些位点的长度一般在4~8bp范围内。通常具有回文结构。切割后形成粘性末端或平齐末端。;;大肠杆菌的EcoR I对DNA的识别顺序和酶作用产物的粘性末端。;;限制酶的命名较为特殊。以EcoRI为例，第1个大写字母E为大肠杆菌的属名(Escherichia)的第1个字母，第2、3两个小写字母co为它的种名(coli)的头两个字母。第4个字母用大写R，表示所用大肠杆菌的菌株。最后一个罗马字表示从该细菌中分离出来的这一类酶的编号。;限制酶是DNA的分子剪刀，是DNA体外重组技术和进行大分子DNA分析的重要工具。如EcoRI、EcoRⅡ、HindⅢ、PstI等。 限制酶的发现对基因工程研究有极大的促进作用。目前已发现数百种可用于DNA研究的限制酶、连接酶和修饰酶等多种酶，总称为分子生物学技术的“工具酶”。;第二节 核苷酸分解代谢(P381) 1、 核苷酸的降解 核苷酸经核苷酸酶催化，水解为核苷及无机磷酸。 非特异性的核苷酸酶，能作用于一切核苷酸。某些特异性强的核苷酸酶只能水解3?-核苷酸或5?-核苷酸，分别称为3?-核苷酸酶或5?-核苷酸酶。;核苷经核苷酶作用分解为嘌呤碱或嘧啶碱和戊糖。 分解核苷的酶有两类 ①核苷磷酸化酶 广泛存在于生命机体中，催化反应可逆；;②核苷水解酶 主要存在于植物、微生物体内，只作用于核糖核苷，催化反应不可逆。 戊糖和戊糖-1-磷酸可进入糖代谢分解或重新利用，嘌呤和嘧啶也可以继续分解。;※2 嘌呤的降解;嘌呤的分解;微生物;灵长类、鸟类、爬虫类以及大多数昆虫中嘌呤的最终产物为尿酸；除灵长类以外的哺乳动物、腹足类则为尿囊素；某些硬骨鱼中则尿囊素再继续分解为尿囊酸；大多数鱼类、两栖类中尿囊酸再分解为尿素和乙醛酸；海洋无脊椎动物星虫类、甲壳类则将