重组基因的导入和鉴定.pptVIP

* * 噬菌斑原位杂交是将膜上结合的DNA进行变性、固定、杂交和放射自显影。将重组体中的DNA纯化出来进行电泳转移，可以检测重组体中与探针DNA同源的序列，这一方法称为“Southern印迹法”。 Southern印迹杂交是DNA的吸印转移，相应的还有只RNA相蛋白质的吸印转移，分别称为“Northern印迹杂交”和“Western印迹杂交”。 * * 四、免疫化学检测法 免疫化学检测法是利用抗体与抗原结合的高度特异性来鉴别基因的。如果某个重组克隆中的外源基因能够表达，在这个克隆中就存在着这个基因的特定蛋白，即可用特异性抗体来检测。常用的有标记抗体测定法和免疫沉淀测定法两种 。 * 四、免疫化学检测法 转化菌落 影印平板 置于含氯仿饱合气体的容器 细菌裂解，抗原释放 覆盖吸附有未经标记的抗体的NC膜 形成抗原抗体复合物 将NC膜与I125标记的抗体温育 放射自显影 与母板对照，挑取所需的重组克隆 标记抗体测定法的步骤： * 用免疫化学法检测克隆在表达载体pUC8上的基因 * 五、DNA-蛋白质筛选法 DNA-蛋白质筛选法(Southwestern screening)是专门设计用来检测同DNA特异性结合的蛋白质因子的一种方法。 用于筛选并分离表达融合蛋白质的克隆。合成此种融合蛋白质的重组DNA分子中的外源DNA序列，编码一种能专门同某一特定DNA序列结合的DNA结合蛋白质(D