第二章 代谢控制发酵的基本思想.pptx

代谢控制发酵;第一节 微生物细胞的调节机制;一、微生物细胞的代谢调节的主要举措 ;;;二、关键酶 是参与代谢调节的酶的总称。作为一个反应的限速因子，对整个反应起限速作用。这些酶在代谢流的枢纽之处形成支柱，不论对代谢流的质和量都起着制约作用。 关键酶可以是变构酶、同功酶、多功能酶。 关键酶可处于分支点也可不处于。;三、酶活性的调节 ;酶活性调节的影响因素;（一）激活 ;; （二）抑制 ;酶活性调节机制 ;（一）别构（变构）酶调节 ;1、别构（变构）酶的结构和特性： ;2、别构（变构）酶的作用程序： ;3、变构酶活性调节类型（模型）;4、变构酶的反应动力学性质 ;; 变构酶的反应速度与底物浓度（或变构抑制剂的浓度）的关系曲线呈S型，有协同性；当底物或效应物浓度极低时，酶反应速度的变化极微小，这是因为效应物浓度极低时，不具有协同性，当效应物浓度超过某个水平（阈值）时酶反应速度急剧增大（减小）。即存在着底物或效应物对反应速度发生影响的阈值。这在代谢控制上具有很大的生理意义。 ;5、变构酶调节的实例 ;6、变构酶的脱敏作用（desensitingation） ;（1）使变构酶解聚： 可利用上述物理、化学等方法处理变构酶，可使变构酶多聚物解聚导致对效应物脱敏，失去调节功能。 （2）基因突变： 为变构酶编码的结构基因的突变可引起脱敏，如诱变育种获得抗类似物突变株中多发生这种变化，在氨基酸的核苷酸发酵育种上，已作为突破微生物代谢控制的一个重要手段利用。 ;7、变构酶调节的特征： ;（3）效应物同调节性酶的结合与基质同酶的结合位点是分开的，但又相互联系的，用多种物理或化学方法处理能使酶脱敏（即对效应物不再敏感），但保留其催化活性。 （4）酶的活性中心及变构中心（调节性位点）可同时被结合，变构中心（副位点）的结合不一定是特异性的（专一性），可以结合不同的物质，产生不同的效应，变构中心的结合可能引起蛋白质分子构象的变化，从而影响酶活性中心的催化活性。 （5）变构效应是反馈抑制的基础，是调节代谢的有效方法。 ; 影响酶活性的调节方式;;;;3、终产物的累积性抑制（cumulative inhibition） 判别特征是：任一终产物单独过剩时，能独立地对共同途径的一个多价变构酶产生部分反馈抑制（某个百分比抑制），并且各终产物的反馈抑制作用互不影响，指既无协作也无对抗。当多种终产物同时过剩时它们的反馈抑制作用是累积的。例如E.Coli中的谷氨酰胺合成酶（GInS）受8种化合物的累积抑制。 ;;;;例如枯草杆菌芳香族氨基酸合成就是这种调节;;例如：E.codi中Asp族氨酸合成途径中AK为三个同功酶，HD为两个同功酶。;; 因此要完全解除终产物的反馈调节，所有终产物都应很少，这对我们打破其代谢调节使Lys、Met、Thr、Ile大量积累带来困难。;四、酶合成的调节;1、诱导作用（酶合成的诱导作用）;操纵子：在DNA链上顺次紧密排列的功能上相互协调的一群基 因。它包括： 启动基因（P）：RNA聚合酶结合的部位。 操纵基因（O）：阻遏物结合的部位。 结构基因（S）：编码酶蛋白的基因，受控于调节基因。 调节基因（I）：产生阻遏物（负作用调节蛋白） 或激活蛋白（正作用调节蛋白） 操纵子学说：调节基因的产物阻遏物，通过控制操纵子中的操纵基因从而影响邻近的结构基因的活性。 操纵子学说认为酶的产生除了由结构基因决定它的结构外，还必须有调节基因来控制它的产生与否。这个学说对发酵工业有着重要的意义。;(二) 酶合成的诱导调节实例与机制（转录的负控诱导和正控诱导）;乳糖操纵子;无诱导物时;有诱导物时;启动酶的合成;（2）转录的正控诱导－麦芽糖操纵子 ;（三）诱导调节的克服 ;组成型突变株的获得、富集方法： ;2、酶合成的阻遏;阻遏的类型;;;; 实 例 (1) 转录的负控阻遏 ;trp operon阻遏系统——终产物的阻遏机制 ;3、分解代谢物阻遏（catabolitic repression）调控 ;（一）分解代谢物阻遏的概念 所谓分解代谢物阻遏是指当细胞内具有一优先利用的营养物（通常是，但并不总是葡萄糖）时，其分解产物对分解利用其它（难利用）营养物质所需的酶系合成起阻遏作用。 ;（二）分解代谢物阻遏的实质 ;(三) cAMP是对酶合成水平的控制; (2)转录开始时，cAMP先与CRP或结合生成cAMP- CRP复合物。 (3) CRP-cAMP复合物再与Lac.opern中的启动基因P 的CRP结合位点结合，从而激活了位点，进而