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粗糙链孢霉生活史 * * 实验三 粗糙链孢霉(Neurospora crassa)的杂交(教材p133-9) 一、实验目的 1.?????? 通过分析粗糙链孢霉杂交后代的表现型,学习掌握顺序四分子遗传分析的基本技术; 2. 掌握着丝粒作图和相关基因定位的原理、技术。 粗糙链孢霉(Neurospora crassa) 属于真菌中的子囊菌纲 (n=7) 无性生殖:分生孢子 生殖方式 有性生殖:不同接合(交配)型: 二、 实验原理 A,a 或 mt+,mt- 有性生殖过程 1.分生孢子落在原子囊果的受精丝上 2.不同接合型的菌丝相接触,两核配对 ·受精→异核体→合核体 ·减数分裂、有丝分裂→8个核 ·子囊果 子囊 子囊孢子 ·适宜条件(60℃ 1-2h), 子囊孢子萌发成新的菌 丝体 1.无性繁殖 2.有性繁殖 单倍体 生活周期短(10d左右) 个体小、生长迅速 易于培养(要求条件简单) 一次杂交可获大量后代 染色体结构和功能类似于高等生物 可直接观察减数分裂产物的排列次序 ·链孢霉材料的优点 ·着丝粒作图 凡是等位基因在减数分裂第一次分裂分离的子囊即为非交换型子囊;凡是等位基因在减数分裂第二次分裂分离的子囊即为交换型子囊。 概括来说, 1 实验材料: 粗糙链孢霉野生型菌株Lys+(接合型A),分生孢子为橘红色 粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型Lys-(接合型a),分生孢子为白色 2 器具: 显微镜(或双目解剖镜)、接种环、载片 等 3 药品和培养基 (1)5%次氯酸钠(或5%石炭酸) (2)完全培养基(马铃薯培养基) (3) 无菌水(各小组自己灭菌—100ml三角瓶) 三、 实验用品 每小组适量玉米粒(如3人组:12粒)(已经浸泡软),用镊子等硬器破碎,平均分装于大试管(自己柜子里的)(每人一个管) +0.1g琼脂+10mL蒸馏水,混匀 插入3-4cm折叠多次的滤纸条 加上棉塞(或专用瓶盖) 操作前准备(用于链孢霉杂交) 在一个100mL三角瓶中装约50-60mL的蒸馏水 (玉米)杂交培养基准备 3. 将上述蒸馏水、培养基进行高压灭菌(培养基灭菌后不摆斜面) 四、 方法步骤 1 菌种活化(教师准备) :两亲本均在28℃条件下培养5d左 右(完全培养基斜面,可添加赖氨酸 ) 2 杂交(本次操作) :两亲本的少许菌丝或分生孢子同时接 种于杂交培养基上。 试管上贴上标签,注明杂交日期和实验者姓名。 25℃ ,一周左右有棕色原子囊果 ,2周左右便发 育为成熟子囊果 。 3 观察(两周以后) 培养物处理(少量无菌水冲掉分生孢子,倒三角瓶中煮沸) 载片制作(滴次氯酸钠→覆载片摁压→挤破子囊) 低倍镜观察,记录统计(注意是否出现基因转变)。 (p137-138) 偏早,孢子尚末成熟…白色 过迟,孢子全为黑色…交换型-非交换型分类困难 观察时期要掌握适当 *
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