大肠杆菌感受态细胞制备和转化.pptVIP

大肠杆菌感受态细胞制备及转化 实验目的 掌握制备和保存大肠杆菌感受态细胞的方法 掌握转化的方法技术 了解转化过程中各因素对转化率的影响 感受态及转化实验原理 定义 感受态（Competence)：细菌处于容易吸收外源DNA 的状态 转化（transformation)：异源DNA分子导入受体细胞的过程 致敏过程: 用理化方法诱导细胞进入感受态的操作 在生长周期的任何时刻自动产生感受态；（e.g. 枯草杆菌） 在生长周期的特定时刻产生感受态；（e.g .大肠杆菌） 受体菌与质粒的选择 受体菌： E.Coli DH5α：无Ap抗性 外源质粒 Ampr抗性基因编码一种周质酶（β-内酰胺酶）可特异地切割Amp的β-内酰胺环，从而使其失去杀菌能力 选择: 如进行蓝白斑筛选时可选用DH5α 、JM109 、 TG1 ； 用T7启动子进行原核表达时可选用BL21(DE3)； 制备感受态细胞方法 原生质体法 电击法 特殊试剂诱导法：CaCl2诱导法 转化率定义及计算 公式： 转化子数/ug DNA = 单菌落数 质粒浓度(ng/ul) X 1uL 2.5ng/uL 影响转化效率的因素 细菌的生长状态：大肠杆菌在对数中期易产生感受态