分子生物学课程教学大纲1.docVIP

PAGE PAGE 5 GDOU-B-11-213附件2： GDOU-B-11-213 分子生物学实验技术 教学大纲 （研究生） 广东海洋大学实验教学部 2011年5月 0109《分子生物学实验技术》课程教学大纲 一、课程概况 课程中文名称 分子生物学实验技术 课程英文名称 Experiment Of Molecular Biology 课程编号 0109 课程类别 □公共必修课 □公选课 □院级限选课 √学科基础课 □专业基础课 □专业限选课 □专业任选课 总学时 36 讲授学时 实验学时 36 总学分 2 开课单位 实验教学部 开课系所 研究生 授课对象 水产、食品和农学等 先修课程 《有机化学》、《生物化学》 执笔人 刘铀 审核人 刘海 审批人 杨捷 修订时间 2011年5月 课 程 简 介 基因组计划、蛋白质组计划、基因重组技术代表了当今生命科学的前沿领域，是揭示生命规律的重要手段。为生物类各专业的研究生开设分子生物学实验技术，使其掌握基因克隆、基因重组、基因表达与检测技术的原理和操作技术对于开阔视野、提高创新能力是十分必要的。 课 程 大 纲 一、课程的性质与任务：近年来分子生物学在医药卫生、农业、环保、轻工等领域有突飞猛进的发展，分子生物学实验技术已成为生命科学及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。本课程每个实验都要求学生动手进行独立操作，要求学生掌握基础的分子生物学实验技术，提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，为专业课程的学习及参加科研实践打下基础。 二、课程的目的与基本要求：熟练掌握分子操作如基因克隆、基因重组、基因表达以及表达产物检测）的基本原理与操作技术；同时结合不同专业要求，开展设计型和研究型实验，以提高学生的科研素养和创新能力。 三、面向专业：生物类各专业的硕士研究生。 四、先修课程: 动物生物化学、微生物学、遗传学、细胞生物学、分子生物学等。 五、本课程与其它课程的联系：《分子生物学》与生物科学中前继课程有着紧密的联系，内容存在一定交叉，但对课程的要求和侧重点均有所不同。学习本课程前，要求学生了解生物化学、细胞生物学、微生物学、分子生物学等课程的理论知识和实验技能。 六、实验名称与类别: 序号 实验名称 学时 实验类别 1 碱裂解法制备质粒DNA 3 操作型 2 感受态细胞的制备 3 操作型 3 质粒DNA酶切与凝胶纯化 3 操作型 4 PCR技术扩增目的基因 3 操作型 5 目的基因与载体的体外连接与转化 3 操作型 6 转化子的筛选 3 操作型 7 重组质粒的酶切鉴定 4 操作型 8 目的基因的诱导表达与检测 4 综合型 9 Western-Blot检测目的蛋白 5 设计型 10 RT-PCR技术从不同组织材料中扩增目的基因 5 研究创型新 七、实验目的、内容与要求 实验1 碱裂解法制备质粒DNA [实验目的]熟练掌握质粒DNA制备的原理与方法，了解质粒DNA的定量方法及其检测。 [实验内容]培养重组大肠杆菌，用碱裂解法制备质粒DNA，用琼脂糖电泳和紫外吸收法检测其纯度与特征性扫描曲线。 [实验要求]获得完整质粒DNA及其浓度、特征吸收曲线；讨论质粒DNA纯度对其后的分子操作可能产生的影响。 实验2 大肠杆菌感受态细胞的制备 [实验目的]熟练掌握大肠杆菌感受态细胞的制备原理、方法、注意事项。 [实验内容]学习用CaCl2处理法制备大肠杆菌感受态细胞，延伸了解酵母及哺乳动物感受态细胞的制备方法。 [实验要求]制备的大肠杆菌感受态细胞转化效率高于106，无其它细菌污染。 实验3 质粒DNA酶切与凝胶纯化 [实验目的]学会用限制酶切的方法线性化质粒DNA及琼脂糖电泳纯化DNA片段的方法。 [实验内容]用限制性内切酶消化质粒载体产生粘性末端，经琼脂糖电泳纯化，通过溶胶、提取、乙醇沉淀的方法获得线性化的质粒DNA。 [实验要求]纯化的线性化质粒DNA经琼脂糖电泳检测为单一条带，含量0.5ug以上。 实验4 PCR技术扩增目的基因 [实验目的]学会使用生物软件设计引物；熟练掌握PCR技术的原理、方法、操作及注意事项；学会根据PCR产物分析、调整扩增反应条件；掌握用酚/氯仿纯化PCR产物。 [实验内容]利用DNAstar（4.0）设计引物，用PCR方法扩增目的基因并用琼脂糖电泳检测扩增效果。 [实验要求]目的基因经电泳检测为单一扩增条带。 实验5 目的基因与载体的体外连接与转化 [实验目的]了解目的基因载体的定向克隆与连接反应条件及重组DNA转化大肠杆菌感受态细胞的方法与注意事项。 [实验内容]将目的基因定向克隆至载体的限制位点，用连接产物转化感受态细胞并在LA抗性培养基上进行筛选。 [实验要求]掌握定向克隆基因的方法及连接反应条件，延伸了解单位点克隆的原理与方法。 实验