《分解纤维素的微生物的分离》课件1.ppt

热点考向示例 随堂达标检测 课堂互动探究 教科书问题解答 3----3　分解纤维素的微生物的分离 一 .基础知识 复合 C1酶 Cx酶 葡萄糖苷酶 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 1.纤维素 多糖 高分子化合物 葡糖糖 木材 作物秸秆 棉花 过滤纸等含量较多 土壤中存在能分解纤维素的微生物 能合成纤维素酶 3、实验验证纤维素酶的作用 ①方法：滤纸崩溃法 ②标准：对产生的葡萄糖进行定量测试 试管 滤纸条 0.1 mol/L 醋酸—醋酸 钠缓冲溶液pH＝4.8 纤维素酶 70～ 80 U/mL 条件 结果 1 1×6 cm 10 mL 1 mL 两试管固定在 50 mL锥形瓶 中,在摇床上以 140 r/min的转 速振荡反应1 h 时间足够 长,滤纸被 2 1×6 cm 11 mL 基本无变化 完全分解 25 1 1 mmol 4．纤维素分解菌的筛选 (1)筛选方法： 法。 (2)筛选原理：刚果红可以与纤维素形成 ，当纤维素被 分解后，刚果红——纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现 ，我们可以通过 来筛选纤维素分解菌。 刚果红染色 红色复合物 纤维素酶 以纤维素分解菌为中心的透明圈 是否产生透明圈 (3)纤维素分解菌的筛选原理的图示理解 此培养基为固体培养基——在其中加入刚果红可形成以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可筛选到纤维素分解菌。 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 1．分离纤维素分解菌的实验设计 (1)实验流程：土壤取样→ →梯度稀释→将样品涂布到 的鉴别培养基上→挑选产生 的菌落。 二、实验操作 选择培养 纤维素分解菌 透明圈 特别提醒　(1)本实验方案中应设置普通培养基(或牛肉膏蛋白胨培养基)作为对照实验。 (2)分离纤维素分解菌先经选择培养，其目的是增加纤维素分解菌的浓度；然后经梯度稀释后，再涂布到鉴别培养基上。 富含纤维素 2)选择培养 ①目的：增加纤维素分解菌的 ，确保能够从样品中分离到所需要的 。 ②选择培养：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在 上，在一定温度下振荡培养1～2 d，直至培养液变 。也可重复选择培养。 浓度 微生物 摇床 混浊 筛选过程中涉及的两种培养基 (1)纤维素分解菌的选择培养基 ①配方： 组分 含量/g 提供的主要营养 纤维素粉 5　 碳源、能源 NaNO3 1　 无机盐 Na2HPO4·7H2O 1.2 KH2PO4 0.9 MgSO4·7H2O 0.5 KCl 0.5 酵母膏 0.5 碳源、氮源 水解酪素 0.5 氮源 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL P29 纤维素分解菌的选择培养基中“选择因子”是什么？ 纤维素粉 液体 没有添加琼脂成分 纤维素粉 将纤维素粉改为葡萄糖 增加纤维素分解菌的浓度，以确保 能够从样品中分离到所需要的微生物 鉴别纤维素分解菌的培养基配方 CMC－Na 5～10 g 酵母膏 1 g KH2PO4 0.25 g 琼脂 15 g 土豆汁 100 mL 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL 固体 琼脂 羧甲基纤维素钠 碳源 刚果红 纤维素分解 纤维素酶 透明圈 （3）挑选菌落 a．刚果红染色法，挑选 的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 b．常用的刚果红染色法包括两种，一种是先 ，再加入 进行 反应，另一种是在 时就加入刚果红。 产生透明圈 培养微生物 刚果红 颜色 倒平板 c．两种刚果红染色法比较 优点 显示出颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作简便，不存在菌落混杂问题 缺点 操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂 ①由于琼脂、土豆汁中均含有淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也