洛伐他汀对人肺腺癌细胞a549的体外作用及其机制研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

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河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究生签名:斟日蛾导师签名:必、学院领导签名: 乙弦g年弓月∑1日 f 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:刹冠娥导师签名: 撕睥乡月11日 中文摘要洛伐他汀对人肺腺癌细胞A549的体外作用 中文摘要 洛伐他汀对人肺腺癌细胞A549的体外作用 及其机制研究 摘 要 目的:研究胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(Lovastatin,LOV) 对人肺腺癌细胞A549体外抗增殖和诱导凋亡作用,观察 LOV联合顺铂(Cisplatin)对A549细胞体外作用的影响,并探 讨其可能的分子机制。 方法:l常规体外培养人肺腺癌细胞A549,采用四甲基 偶氮唑蓝(tetrzolium.based colorimetric assa5 MTT)法检测 LOV不同浓度组(O、2、5、10、20、32、50、64umol/L)、不 同时间组(24、48、72h)对细胞存活和生长的影响,从而选择 适当的药物浓度及作用时间。根据MTT结果,设置对照组 及实验组(2、5、1 O、20 umol/L)。流式细胞仪(flow cytometry, FCM)测定LOV对A549细胞周期分布和凋亡的影响,光学 显微镜观察细胞形态学改变。分别提取各组细胞总RNA,鉴 定其完整性及含量,通过反转录一聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)半定量检测 LOV处理前后A549细胞中p27、PTEN基因mRNA的表达 水平。采用流式细胞仪间接免疫荧光技术半定量检测LOV 处理前后A549细胞中p27、PTEN蛋白的表达水平。2采 用MTT比色法检测LOV与抗癌药物顺铂联合应用对A549 细胞的增殖抑制作用,采用金氏公式[1】分析相互作用指数 (Interaction Index),评价联合后的作用;流式细胞仪检测 LOV联合不同浓度顺铂对细胞凋亡的影响。 中文摘要结果:1 中文摘要 结果:1 MTT结果显示:LOV(0、2、5、10、20、32、 50、64umol/L)对A549细胞具有抑制增殖的作用。不同浓度 LOV处理细胞24~72h后,与对照组相比,各处理组OD值 均有不同程度的下降,差异具有显著性(PO.05)。且随着LOV 处理浓度的增大、作用时间的延长,OD值逐渐下降,即LOV 对A549细胞的增殖抑制作用有明显的剂量一效应和时间一 效应依赖关系。LOV作用A549细胞后,有明显的细胞形态 学改变:未经药物作用的细胞呈多形性或梭形,形态饱满, 而用药组细胞缩小,细胞核固缩,细胞突起减少,胞体折光 性减弱,胞浆内可见有颗粒。随LOV浓度和处理时间延长, 细胞可变圆脱壁,部分细胞胀大破裂。流式细胞术检测A549 细胞周期分布和凋亡显示,0、2、5、10、20umol/L LOV作 用A549细胞48h后,随药物浓度增大,Go/Gl期细胞逐渐增 多,S期和G2/M期细胞则逐渐减少。即LOV可阻滞A549 细胞周期进程于G0/Gl期,该作用呈剂量一效应依赖关系。O、 2、5、10、20umol/L LOV作用A549细胞48h后,出现典型 的亚二倍体凋亡峰,依A549细胞浓度增大而逐渐增高;最 大凋亡率为34.02%。流式细胞仪间接分析PTEN、p27蛋白 表达显示:0、2、5、10、20umol/L LOV作用A549细胞48h 后,PTEN和p27的荧光指数FI值均随处理浓度增大而逐渐 增大。对于每一种蛋白,比较其处理组和对照组的FI值,差 异具有显著性(PO.05)。半定量RT-PCR检测结果显示:洛伐 他汀处理前A549细胞PTEN、p27基因均表达阳性。与对照 组相比,经LOV处理的A549细胞中PTEN、p27 mRNA表 达明显升高(PO.05)。PTEN、p27在mRNA水平及蛋白表 达水平均呈明显正相关(PO.05)。2 MTT比色法分析LOV联 中文摘要合顺铂对A549细胞的增殖抑制作用,结果显示:2、5umol/L 中文摘要 合顺铂对A549

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