形态暨影像平台—流式细胞仪介绍概论.pptVIP

形态暨影像平台—流式细胞仪 生理129室 BD FACSCalibur 全自动双激光四色流式细胞分析系统 FACSCalibur 检测器组 （激光器） PMT位置 （荧光光谱峰值范围） 适用染料 颜色 488nm蓝色激光 FL1 (波长515-545nm） FITC 绿 FL2 （波长564-606nm） PE, PI 橙红 FL3 （波长650nm) PerCP, PerCP-Cy5.5, Cy5 红 635nm红色激光 FL4 (波长640-680nm) APC 深红 流式细胞仪的检测范围 细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 …… 细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内/外的细胞因子 激素结合位点、细胞受体 蛋白磷酸化 pH值 钙离子浓度 细胞膜电位、线粒体膜电位 …… DNA细胞周期分析 细胞周期 G2 M G0 G1 s 200 400 600 800 1000 G0 G1 s G2 M DNA含量 细胞数量 2N 4N 细胞周期分析 活体染料CFSE测定细胞增殖 Proliferation Wizard Basic Model File: Date acquired: 14-Nov-08 Date analyzed: 19-Oct-2012 Parent: 63.73 % at 171.00 Generation 2: 20.44 % at 151.81 Generation 3: 12.01 % at 132.62 Generation 4: 3.82 % at 113.43 Proliferation Index: 1.29 Nonproliferative Fraction: 0.82 Division Error Index: 1.00 Spacing of generations: 19.19 For cells at generation = 3: Upper Generation P.I.: 4.55 Precursor Frequency: 0.044944 Number of Cells Analyzed: 17445 Reduced Chi-Square: 9.643 CBA （微球阵列分析技术） 胞内活性氧水平的检测与分析（ROS） 细胞膜电位的检测与分析 细胞内钙离子浓度的检测与分析 细胞表面分子的检测与分析 免疫细胞及亚群的检测与功能分析 血液系统细胞表面标志的研究 细胞群体及细胞表面标志变化的监测 细胞表面标志构成性质的分析 其他常用检测与分析 流式细胞仪的主要技术指标 荧光测量灵敏度（衡量仪器检测微弱荧光信号的重要指标） 以能检测到单个微球上最少标有FITC或PE荧光分子数目来表示，一般可达到600个荧光分子。 仪器的分辨率（衡量仪器测量精度的指标） 用变异系数CV(Coefficient of Variation)值来表示。最佳状态时CV2 前向角散射光检测灵敏度 能够检测到的最小颗粒大小，一般可检测到0.2-0.5um左右 分析速度 每秒可分析的细胞数。一般可达3000个/秒~6000个/秒，FACSCalibur的分析速度为10000个/秒 实验流程 1.预约 填写预约表 确定实验方案（染色方案，对照设置） 2.上机实验 样本获取及分析 3.实验结果输出 4.登记 生理楼 129