实时荧光定量PCR端粒酶检测试剂盒小鼠.PDFVIP

实时荧光定量PCR端粒酶检测试剂盒(小鼠) 修订日期：2016.07.22 Cat Number：KGA1028M-KGA1029M Store at -20℃for 12 months，避光 For Research Use Only(科研专用) 一、试剂盒说明 产品概述： 端粒是真核生物染色体末端特殊的DNA-蛋白结构，含多个重复序列 （5’-TTAGGG-3’），端粒结构的形成和功能的维 持需要端粒结合蛋白的直接或间接参与。端粒酶是细胞体内一种核糖核蛋白复合体，是由RNA 和蛋白质亚基组成的一种 特殊的逆转录酶，其可以利用自身的RNA 模板合成末端DNA，并添加到染色体末端以克服末端序列的丢失，从而使细胞 获得增殖能力。 端粒酶蛋白催化亚基 （TERT 或TRT）具有反转录酶的主要特征，其表达在正常细胞中受到抑制，研究表明，TERT 或TRT 的表达与端粒酶活性的表达一致，与端粒酶的活化程度密切相关。Wisman 等在人卵巢癌中利用逆转录PCR检测 hTERT 的mRNA 的表达，并采用TRAP法检测端粒酶活性，结果证实二者均存在于恶性肿瘤中并且表达模式相同。基 于上述原理，凯基实时荧光定量PCR端粒酶检测试剂盒通过检测TERT 的mRNA 表达水平来间接反应端粒酶的活性。 实时荧光定量PCR （SYBR Green Real-time PCR）方法以其卓越的快速性及定量性被广泛应用于科研领域，使用 本试剂盒可以准确简便地进行mRNA 的表达分析。试剂盒采用SYBR Green qPCR Master Mix 为荧光实时定量PCR和 Two-Step 荧光实时定量PCR 设计的最优反应体系，并结合特异性的细胞端粒酶催化亚基基因TERT 引物，简化实验步 骤和提高实验效率。Master Mix 含有Maxima Hot Start Taq DNA 聚合酶、dNTPS、进行优化处理的PCR 反应缓冲液以 及SYBRGreen 染料。使用Hot Start Taq DNA 聚合酶，为PCR反应提供了更高的产量和灵敏度、特异性，能够检测低 至10个拷贝的目的基因。 本试剂盒可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对细胞基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。 只需加入样品DNA 模板，反应即可进行。 2.应用仪器： 适应于大多数的Real-time PCR扩增仪，包括Applied Biosystems，Eppendorf，Corbett，Bio-Rad，Roche，杭州 博日 （Line-GeneBioer）等品牌的PCR扩增仪。 二、 试剂盒组份 组份 KGA1028M KGA1029M 保存条件 20 tests 50 tests Maxima SYBR Green qPCR Master Mix （2×） 250μL 700μL -20℃，避光 Water,nuclease-free 300μL 800μL TERT-F Primer （10μM） 30μL 70μL TERT-R Primer （10μM） 30μL 70μL GAPDH-F Primer （10μM） 30μL 70μL GAPDH-R Primer （10μM） 30μL 70μL 三、 实验内容： 1.操作步骤： 1). 提取样本RNA，并进行逆转录获得cDNA。（可参考凯基 RNA 提取以及逆转录试剂盒） 2). 试剂溶解后，轻轻混匀并低速离心。 3). 进行25μL体系的实时定量PCR请参考以下表格 （DNA 模板下一步中添加）： Maxima SYBR Green qPCR Master Mix （2×） 12.5μL TERT-F/