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单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术: 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础。 为什么要进行动物细胞培养? 1.动物细胞培养(目的:获得细胞或其代谢产物) 如何进行细胞培养? 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 概念:从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 剪碎 胰蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 比老龄动物的组织细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛。分化程度越低,增殖能力越强,越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体。 细胞增殖缓慢,核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内,保持正常二倍体核型 传代培养 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题: 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质? 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件? 讨 论 其中含有适合细胞生长增殖的各种营养物质 1、无菌、无毒 2、营养 3、适宜的温度和PH值 4、气体环境 (无菌处理培养液和培养用具,添加一定量的抗生素,定期更换培养液) (葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。) (36.5±0.5℃, 7.2-7.4) O2和CO2(95%空气和5% CO2 ) 动物细胞培养的条件: 维持培养液的PH 1、大规模的生产有重要价值的生物制品; 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体。 2、为基因工程技术提供受体细胞; 3、有毒物质的检测; 4、细胞的生理、药理、病理研究; 如用于筛选抗癌药物等,为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据。 动物细胞培养技术的应用 获得细胞 或细胞产物 细胞的全能性 细胞或细胞产品 新的个体 或细胞产品 培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养结果 葡萄糖、 动物血清、 蔗糖、 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原 理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体(克隆动物)。 分 类 胚胎细胞核移植: 体细胞核移植: 细胞分化程度低,恢复全能性容易。 细胞分化程度高,恢复全能性不容易。 动物细胞核移植概念: 体细胞核移植的过程 细胞培养技术 细胞核移植技术 体内胚胎培养和 胚胎移植技术 思考1.上述过程运用了哪些技术? 思考2.为何选用MⅡ期卵母细胞? 因为卵母细胞体积大,易操作,含有促使细胞核全能性表达的物质和营养条件,且这些物质活性最高。MⅠ期细胞质未成熟,不能支持胚胎发育全过程。 讨论: 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,为什么必须先去掉受体卵母细胞的核? 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞。 培养的动物细胞一般当传代至10~50代左右时,部分细胞核型可能会发生变化,其细胞遗传物质可能会发生突变,而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞,想一想,这是为什么? 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么? 绝大部分DNA来自于供体细胞核,但其核外还有少量的DNA,即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。 此外,即便动物的遗传基础完全相同,但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系,核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同,其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同,从这一角度看,克隆动物不会是核供体动物100%的复制。 体细胞核移植技术的应用前景: 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程; 2、保护濒危物种; 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植; 4、了解胚胎发育和衰老过程;追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病; 1、成功率比较低(平均不到10%); 2、大多存在健康问题; 3、克隆动物食品安全问题。 体细胞核移植技术存在的问题: 此外,体细胞核移植后的重组细胞直接发育成新个体属于无性繁殖,产生的后代无更大变异性,而环境是多变的,易造成该个体适应能力降低,易被淘汰。 P50 思考与探究 2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗?为什么? 动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄,失去了发育成完整个体的能力,所以
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