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天津医药2016年2月第44卷第2期 237
双重实时荧光定量PCR检测人维生素D受体的
方法学构建
喻妙梅，于洋，张俊，姚霜，潘丽莉，罗光华△
摘要：目的 建立单管检测人维生素D受体（VDR）及甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因的双重实时荧光定
量聚合酶链反应（dualreal-timePCR）的方法。方法 以GAPDH基因为内参，采用PrimerPremier5.0软件设计特异
性引物及TaqMan探针，进行PCR扩增检测VDR基因。将VDR及GAPDH扩增产物片段纯化后克隆构建成重组质
粒，作为定量检测基因表达的标准品，并用于分析该方法的灵敏度和重复性。结果 PCR扩增产物经测序分析证实
1 5
为VDR及GAPDH特异性片段；该方法检测VDR与GAPDH灵敏度达40拷贝/μL；线性范围为4.00×10 ～4.00×10
2
拷贝/μL；决定系数R 分别为0.998、0.999；扩增效率E分别为96.10%、85.15%；批内变异系数（CV）分别为0.09%~
1.21%、0.35%~0.88%；批间CV分别为0.17%~0.51%、0.51%~2.46%。结论 成功建立了单管检测人VDR及GAPDH
的双重实时荧光定量PCR方法，且该方法特异性好、灵敏度高、可快速高通量检测VDR 的相对表达量，有效缩短时
间，减小实验误差。
关键词：受体，骨化三醇；聚合酶链反应；甘油醛-3-磷酸脱氢酶类；维生素D受体；双重实时荧光定量PCR
中图分类号：R331 文献标志码：A DOI:10.11958/59072
EstablishingamethodfordetectionofhumanvitaminDreceptorusingdualreal-time
fluorescencequantitativePCR
YUMiaomei，YUYang，ZHANGJun，YAOShuang，PANLili，LUOGuanghua△
ComprehensiveLaboratory，TheThirdAffiliatedHospitalofSoochowUniversity，ChangzhouKeyLabofIndividualized
DiagnosisandTreatmentAssociatedwithHighTechnologyResearch，Changzhou213003，China
△CorrespondingAuthor E-mail:shineroar@163.com
Abstract: Objective Toestablishadualreal-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction(dualreal-
timePCR)assaytodetecthumanvitaminDreceptor(VDR)andglyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase(GAPDH).
Methods GAPDHgenewasusedastheinternalcontrol.ThespecificprimersandTaqManprobesweredesignedbyPrimer
Premier 5.0 software,whichwereappliedtodetecttheVDR/GAPDHmRNAlev
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