课件：免疫印迹技术.pptVIP

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 3、封闭 电泳转移后，固相纸膜上还留有无蛋白组分结合的区域，在对蛋白质进行专一性检测的时候，由于免疫学检测试剂中的蛋白质（抗体），在与特异性抗原结合的同时也会非特异的结合固相上的空白区域，产生高背景，导致检测结果不明显，因此要对这些空白区域进行封闭。 最常用的封闭剂就是脱脂奶粉。 二、基本操作流程 各种常见的封闭剂 封闭缓冲液?? 组成 优点 缺点 5%脱脂奶粉 5%脱脂奶粉，溶于PBS中（w/v） 便宜，背景清晰 易变质，可掩饰某些抗原，不适合于亲合素/链霉亲合素技术 5%脱脂奶粉/吐温 5%脱脂奶粉溶于0.2%吐温20/PBS中（w/v） 便宜，背景清晰 易变质，可掩饰某些抗原 BSA（牛血清白蛋白 ） 3% BSA 信号强 相对较贵 4、免疫检测 把已经封闭过的膜放入加入已知抗体的缓冲液中，对特异性的靶抗原进行检测。 这个过程通常会发生多步反应，一般采用间接检测法，常用的检测系统有放射性同位素、酶、荧光素等，通过放射自显影或显色反应检测抗原-抗体复合物，从而达到对蛋白质进行特异性检测和鉴别的目的。 二、基本操作流程 原 理 流 程 图 三、注意事项 1． 免疫印迹技术所测定的只是目的蛋白的相对含量。因此不能确定一种细胞含有多少目的蛋白，只能确定该蛋白存在与否及其它条件下与其他细