化妆品中禁用物质氨基己酸的检测方法.docVIP

PAGE 附件8 化妆品中禁用物质氨基己酸的检测方法 1 适用范围 本方法规定了测定化妆品中氨基己酸的高效液相色谱法。 本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中氨基己酸的含量测定。 2 方法提要 氨基己酸在210nm处有紫外吸收，经提取后用高效液相色谱分离，并根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量。对于阳性结果，可用液相色谱-质谱进行进一步确证。本方法中氨基己酸的检出限为50ng、定量下限为150ng；取0.2g样品时的检出浓度为125?g/g，最低定量浓度为400? 3 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。 3.1 甲醇，色谱纯。 3.2 磷酸，优级纯。 3.3 磷酸二氢铵。 3.4 氯化钠。 3.5 甲酸，色谱纯。 3.6 氨基己酸，纯度≥99%。 3.7 标准储备溶液（?＝500mg/L）：称取氨基己酸约0.05g（精确到0.1mg）于小烧杯中，加水适量，超声溶解后转移至100mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为500mg/L的标准溶液。 3.8 系列浓度标准工作溶液：移取氨基己酸标准储备溶液0.20mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此时溶液中各组分浓度分别为10mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L和500mg/L。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器，配色谱工作站。 4.2 液相色谱质谱联用仪。 4.3 超声波清洗器。 4.4 离心机。 4.5 天平，感量0.0001g。 4.6 天平，感量0.001g。 5 测定步骤 5.1 样品预处理 称取样品约0.2g（精确至0.001g）于10mL具塞比色管中，加入0.5mL饱和氯化钠溶液，旋涡振摇1min，用流动相稀释至刻度，超声浸提20min，浑浊样品可取适量5000rpm离心5min。经0.45? 5.2 测定 5.2.1 色谱参考条件 色谱柱： C18 柱，250mm×4.6mm，5?m 流动相：甲醇＋0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调节pH至3.0）＝2＋98； 流速：1.0mL/min； 检测器：二极管阵列检测器，检测波长为210nm； 柱温：25℃ 进样量：20? 5.2.2 校准曲线的制备 在设定色谱条件下，取氨基己酸系列浓度标准工作溶液（3.8）20? 5.2.3 样品测定 在设定色谱条件下，进20? 5.2.4 平行实验 按以上步骤，做两份样品的平行测定。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。 6 计算 D ? ? ? V w（氨基己酸）= ——————×10-4 m 式中：w（氨基己酸）——化妆品中氨基己酸的质量分数，%； ? —— 从校准曲线上查得的待测样液中氨基己酸的质量浓度，mg/L； V —— 样品定容体积，mL； m —— 样品取样量，g； D —— 稀释倍数（不稀释则取1）。 7 回收率和精密度 经多家实验室验证，氨基己酸的加标回收率在91%～113%之间，相对标准偏差在0.2%～4.0%之间。 8 色谱图 min min 2 4 6 8 10 mAU -2 0 2 4 6 8 10 12 14 6.924 图1 氨基己酸标准色谱图 9 阳性结果的确证 测定过程中如果有阳性结果，可采用液相色谱-质谱法（LC/MS）进行进一步确证。 在相同的实验条件下，如果样品中检出的色谱峰的保留时间和紫外光谱图与标准溶液中对应的成分一致，所选择的检测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表1规定的范围，则可以判定样品中存在对应的待测成分。 表1 阳性结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差 相对离子丰度（k） k≥50% 50%﹥k≥20% 20%﹥k≥10% k≤10% 最大允许偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 9.1 液相色谱参考条件 色谱柱：C18，35mm×2.0mm， 流动相：甲醇＋0.1%甲酸水溶液=10+90； 流速：0.2mL/min； 进样体积：20μL。 9.2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源（ESI源）； 监测模式：正离子监测模式； 离子源电压（IS）：4500V； 鞘气：35arb、辅助气：5arb； 毛细管温度：350℃ 碰撞能量（CE）值：35； 保留时间：1.03min； 定性离子对：132.2/114.2 m/z。 RT: RT: 0.00 - 15.00