树突状细胞诱导白血病细胞分化与其作用机制的初步分析.pdfVIP

树突状细胞诱导白血病细胞分化及其作用机制的初步研究 硕士研究生： 于连玲 专 业： 老年医学 研究生导师： 叶欣 教授 中文摘要 目的：建立体外扩增C57BL／6小鼠树突状细胞(dendriticcell，DC)的方法；应用反 复冻融法制备FBL．3小鼠红白血病细胞肿瘤抗原并致敏DC，观察致敏DC培养上清对 FBL．3小鼠红白血病细胞的诱导分化作用，初步探讨DC诱导白血病细胞分化作用的机 制，为白血病的诱导分化治疗提供一条新的途径。 集落刺激因子(granulocyte．maerophagecolonystimulating C57BL／6小鼠骨髓细胞，光镜和电镜观察DC发育过程中形态学变化；流式细胞术检测 鼠红白血病细胞，反复动融法制备FBL．3肿瘤抗原，收集备用。⑧制备的FBL．3肿瘤 和致敏DC第8天培养上清中IL．12的浓度；⑤分四组：标准IL．12组(阳性对照组)； 分化后细胞分别用瑞氏染色记数单核细胞数、透射电镜观察细胞的超微结构、流式细胞 术检测细胞表面CDl4分子的阳性表达率，观察三组的有何不同，并分析FBL．3细胞分 化情况与IL．12浓度的关系。 结果：①用IL．4和GM．CSF联合培养小鼠骨髓细胞3天后，可见细胞形态发生改 变，细胞形态不规则；培养第6-8天，细胞表面出现较多毛刺样突起，拉长，为典型 致敏与未致敏两组比较具有统计学意义(P0．01)；透射电镜见：经致敏DC培养第8 天上清作用后的FBL．3细胞部分具有了典型单核细胞的特性，如马蹄状核、细胞核核膜 完整、线粒体、核糖体等细胞器清楚，而未致敏组上述特点少见；流式细胞仪分析显示： O．01)；④对各组细胞的诱导分化率和培养上清中IL．12的浓度作相关性比较，结果显示 两者高度相关。 结论：①应用IL．4联合GM．CSF培养小鼠骨髓细胞，可大量扩增成熟DC，培养 的DC符合其自身的特性。@)FBL．3细胞经致敏DC培养上清的诱导能转化为单核细胞 (且转化率明显高于未致敏DC培养上清)，转化后的单核细胞符合其自身的特性。③ 转化为单核细胞的比例与培养上清中IL．12的浓度成高度正相关关系，提示DC培养上 清诱导作用的机制与IL．12有关。 关键词：树突状细胞白血病细胞 白细胞介素．12分化单核细胞 2 A OF OFDENDRITICCELLSINDUCE STUDYTHEⅣ匝CHANISM INTOTHE ERYTHRoLEUKEⅦACELLSTODIFFERENTIATE MONOCYTESINⅥTRO Research orientation：Gerontology Yu Postgraduatestudent：Lianling Yc Graduatestudenttutor：Xin Tousethemethodof dendriticcellsfromC57BL／6micebone Objective expanding marrowinvitroandto it with identify phenotype determination．Tomakeuseoffreeze methedto FBL一3leukemiccelltumor t