细胞周期的流式检测方法---中国科学院上海生命科学研究院.docVIP

PAGE PAGE 1 细胞周期的流式检测方法 细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为G0/G1期、S期、G2/M期。在科研实践中，很多实验具有对细胞群体的周期分布进行检测的需求。细胞群体周期测定的方法有很多种，最常用的是PI（碘化丙啶）渗入DNA进行染色，然后通过流式细胞仪检测PI从而测定细胞群体的周期分布。 因此，下面笔者主要通过BD（Becton＆Dickinson）公司生产的BD FACSCalibur流式细胞仪测定PI标记的细胞群体为例，对细胞周期的流式检测方法进行阐述。 PI染色步骤概略 1、单细胞悬液离心，1500rpm , 5min，弃上清。 2、PBS 1ml离心，弃上清。 3、70%酒精2ml，4℃，30min，离心，弃上清液。 4、PBS 1ml离心，弃上清。 5、RNase A的PBS溶液 (20ug/ml)，500ul，37℃，30min，离心弃上清。 6、PBS 1ml离心，弃上清。 7、PI的PBS溶液(50ug/ml)，500ul，室温避光孵育30min。 8、吹打混匀，300目筛网过滤至流式管中，4℃保存，待测。 Calibur仪器设置及数据收集 依次打开Calibur机器电源、电脑开关和CellQuest Pro软件，按快捷键Command+B连机，按快捷键Command+