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生物大分子的结构 与功能 第一章 核酸的结构和功能 Structure and Function of Nucleic Acid 目 录 第一节 核酸的种类、分布和化学组成 第二节 核酸的分子结构 第三节 核酸的理化性质及其应用 第四节 核酸的制备、测定及研究技术 核酸的发现和研究工作进展 1868年 Fridrich Miescher从脓细胞中提取“核素” 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质 1953年 Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型 1966年 Nirenberg发现遗传密码 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶;Sanger建立DNA测序方法 1981年 T.Cech发现了核酶 1985年 Mullis发明PCR 技术 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP) 1999年 中国获准加入人类基因组计划 2001年 美、英等国完成人类基因组计划基本框架 第一节 核酸的种类、分布和化学组成 一、核酸的生物学功能 二、核酸的种类和分布 三、核酸的化学组成 一、DNA的分子结构 （一）DNA 一级结构 （二）DNA碱基组成的Chargaff规则 （三）DNA的二级结构 （四）DNA的三级结构 （一）DNA 一级结构 DNA的一级结构是由数量极其庞大的四种脱氧核苷酸，dAMP,dGMP,dCMP,dTMP通过3′5′-磷酸二酯键连接起来的线形或环形多核苷酸链。 DNA分子中核苷酸的排列顺序叫做DNA的一级结构，简称为碱基序列。 一级结构的走向规定为5′→3′。不同的DNA分子具有不同的核苷酸排列顺序，因此携带有不同的遗传信息 （二）DNA碱基组成的Chargaff规则 Chargaff首先注意到DNA碱基组成的某些规律性，在 １９５０年总结出DNA碱基组成的规律： 1. 同一生物的不同组织的DNA碱基组成相同； 2. 同一种生物DNA碱基组成不随生物体的年龄、营养状态或者环境变化而改变； 3. 几乎所有的DNA，无论种属来源如何，其腺嘌呤摩尔含量与胸腺嘧啶摩尔含量相同［A］ =［T］，鸟嘌呤摩尔含量与胞嘧啶摩尔含量相同［G］ =［C］，总的嘌呤摩尔含量与总的嘧啶摩尔含量相同［A］＋［G］=［C］＋［T］。 4. 不同生物来源的DNA碱基组成不同，表现在A＋T/G＋C比值的不同。这些结果后来为DNA的双螺旋结构模型提供了一个有力的佐证。 DNA超螺旋的形成 超螺旋状态的定量描述 核小体盘绕及染色质示意图 二、RNA的分子结构 （一）RNA一级结构 和类别 （二） tRNA 的分子结构 （三） rRNA的分子结构 （四）mRNA的分子结构 （一）RNA的类别和一级结构 （二) tRNA 的分子结构 tRNA 的二级结构 ——三叶草形 tRNA的三级结构 —— 倒L形 第三节 核酸的理化性质及其应用 一、核酸的一般性质 二、核酸的紫外吸收性质 三、核酸的变性、复性和分子杂交 一、核酸的一般性质 1、性状：DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末。 2、粘性：核酸的水溶液粘度很大，DNA分子粘度大于RNA。核酸变性后，粘度下降。 3、溶解性：RNA和DNA都是极性的化合物，两者都微溶于水，不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂。它们的钠盐易溶于水。 核酸的提取？ 4、核酸的酸碱性质 核酸的磷酸基具有酸性，碱基具有碱性，因此，核酸具有两性电离的性质。但核酸中磷酸基的酸性大于碱基的碱性，其等电点偏酸性。DNA的pI约为4～5，RNA的pI约为2.0～2.5，在pH7～8电泳时泳向正极。 二、核酸的紫外吸收性质 1、光吸收： 紫外吸收波段：240－290nm 最大吸收峰：260nm 2、变性后的光学性质： （1）增色效应： 与天然DNA相比，变性DNA因其双螺旋结构破坏，使碱基充分外露，因此，紫外吸收增加，这种现象叫增色效应。 （2）减色效应： 若变性DNA复性形成双螺旋结构后，其紫外吸收降低，这种现象叫减色效应。 DNA的紫外吸收光谱 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 三、核酸的变性、复性和分子杂交 （一）变性 （二）复性 （三）核酸的分子杂交 (一）变性 1、DNA变性的概念：指DNA分子中的双螺旋结构解链为无规则线性结构的现象。 2、DNA变性的本质：维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。 3、导致DNA变性的因素：凡能破坏双螺旋稳定性的因素，如加热、极端的pH、有机试