多种细胞体系Gq蛋白偶联受体和IP3受体偶联的分析.pdfVIP

中文摘要 感神经节被首次发现，它是一种慢激活，非失活的电压依赖 性外向钾离子电流，因其可被毒蕈碱受体强烈抑制而得名。 自1998年以来人们逐渐认识到其分子基础是KCNQ家族 (KCNQ2／3)的钾离子通道。M电流与神经系统的兴奋性密切 相关。自电流被发现到现在20多年的时间里，人们对其调 节机制做了大量深入的研究，耳前己发现许多于G0蛋白偶 联的受体激活后均能引起M电流的抑制，并且膜磷脂酰肌醇 4，5二磷酸(PIP2)参与了膜受体的信号转导。己证实G。 蛋白偶联受体激活后，都会引起位于胞膜内侧的PIP2水解， 产生IP，和DAG。已有的研究结果证实M1受体的激活引起 M电流的抑制是由于PIP：的水解所为，而另外一种受体BK2 受体激活后虽然也产生I^和DAG，但它激活后所引起的M 电流抑制是通过钙离子介导，由钙调素来实现的。同样是利 和钙离子来实现对M电流的调控?因此，目前对于这一问题 有人提出了用微域结构来解释这种信号传导的特异性，他们 认为BK2受体与IP3受体处于同一个微域结构内，因此BK2 受体激活后所产生的IP，能以较大浓度作用于附近的IP3受 体，进而引起细胞内钙释放；而M受体和IP3受体却没有形 成相应的微域结构，因此其激活后所产生的IP3在局部不能 形成使IP3受体激活的有效浓度，从而不能引起细胞内钙的 释放。上述实验结论是建立在以大鼠颈上交感神经节为研究 的基础上而得出的。众所周知，磷脂酶C信号通路是一种广 泛存在于众多生命形式中的信号转导机制。因此，这种信号 转导的差异性在其他的神经细胞是否存在还不得而知。这一 问题的阐明，将对深入了解磷脂酶C信号通路的多样性具有 中文摘要 至关重要的意义。 · 本小组前期的研究结果表明：在不同的神经细胞中，M，， DAG，但是引发内钙释放的作用之间存在明显不同，在颈上 神经节细胞内BK2，H1，AT，受体激活后均可以引起内钙的 升高，而M，受体则不能。在海马神经细胞内，BK2，H1， M，受体激动后引起内钙升高，而ATl受体则不能。在HEK293 细胞内，过表达M。和BK2受体引起的内钙释放与神经细胞 又有所不同，二者均可以引起内钙升高。在爪蟾卵母细胞过 表达M。和BK2受体也均可以引起内钙的升高。本实验以大 鼠颈上交感神经节细胞、海马神经元、HEK293细胞、爪蟾 卵母细胞为研究对象，利用免疫共沉淀技术观察不同Ga蛋 白偶联受体和位于内质网膜上IP3受体之间的关系，探究是 否存在一种信号微域以及其特点，从而为G。蛋白偶联受体 的信号通路的多样性寻找生化依据。 目的：利用免疫共沉淀技术，在两种不同类型的神经细 胞、HEK293细胞以及爪蟾卵母细胞，观察不同Ga蛋白偶 联受体与内质网113受体之间的关系。 SDS．PAGE，Western blot等方法观察在颈上交感神经节和海 马神经元中上述四种G。蛋白偶联受体与内质网IP3受体之间 的关系。在HE怼93细胞中，利用脂质体转染的方法外源性 的关系。在爪蟾卵母细胞中，利用体外转录的RNA在卵母 细胞外源性表达M，和BK2受体，观察这两种受体与IP3受体 之间的关系。 中文摘要 结果：(1)在颈上神经节和海马神经元中，均可检测到 神经元中，均可检测到IB受体的表达。(3)免疫共沉淀的 结果表明，在颈上交感神经节中，H。、AT，、BK2受体均可 以和IP，受体共沉淀，未发现M，和IP3受体共沉淀。在海马 神经元，AT，受体可以和IP3受体共沉淀，未发现M，、H】、 受体的表达。(5)在外源性表达这四种受体的HEK293细胞 中，均可以检测到IP3受体的表达。(6)在过表达这四种受 不能与IP3受体共沉淀。(7)在过表达M】和BK2受体的爪蟾 卵母细胞中，均可以检测到这两种受体的过表达。(8)在过 表达M，和BK2受体的爪蟾卵母细胞中，均可以检测到IP3 受体的表达。(93在爪蟾卵母细胞中，这两种受体均可以和 IR受体共沉淀。 结论：(1)在大鼠颈上交感神经节细胞中中，M，受体和 Hl、ATl、BK2受体与IP3受体之间的关系不同，其中，H1、 存在偶连关系。在海马神经元中，AT。和IP3受体相偶连， 在偶连关系，与神经组织存在明显不同。(3)在爪蟾卵母细 胞中，M，和BK2受体与IP3受体之间存在偶联关系，与 与IP3受体