基因操作原理04.pptVIP

（四）探针的标记 probe labeling 1．均一标记 切口平移nick traslation: E.coli DNA polyI 随机引物 random primer: 6Nt or 6～12nt klenow 2．单链探针 ssDNA模板，通用引物，合成ssDNA探针 RNA探针，RNA polymerase 3．末端标记 Klenow 标记3’端, 补平和置换反应 T4 polymerase 标记3’端 3’-5’外物活性强，特别适用于3’突出末端 Kinase 标记5’端 正反应 32P→5’-OH NNNN→5’pNNNN 交换反应 过量ATP 使5’-P→ADP then 32P→5’ 末端转移酶标记3’ 4．寡核苷酸 Kinase 末端转移酶 5．标记物 放射性: 32P，33P，35S 非放射性: DIGoxigenin Biotin 标记 dUTP (五) DIG标记/检测举例 1.探针标记 6 Nt随机寡核序列苷酸引物, Klenow标记 2．检测 漂洗 blocking 免疫反应 labeled Anti-DiG-Ab-Ap 洗涤 显色反应 化学发光检测 NBT-BCIP