mCherry红色荧光标记乳酸菌的融合表达系统构建及应用.PDF

492 生 物 工 程 学 报 陈英 等/mCherry 红色荧光标记乳酸菌的融合表达系统构建及应用 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Mar. 25, 2019, 35(3): 492−504 DOI: 10.13345/j.cjb.180306 ©2019 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法· mCherry 陈英，王培娟，张文君，杨丘旭，杨瑶 南京师范大学 金陵女子学院，江苏 南京 210097 陈英, 王培娟, 张文君, 等. mCherry 红色荧光标记乳酸菌的融合表达系统构建及应用. 生物工程学报, 2019, 35(3): 492–504. Chen Y, Wang PJ, Zhang WJ, et al. Construction and application of mCherry red fluorescent protein fusion expression system in lactic acid bacteria. Chin J Biotech, 2019, 35(3): 492–504. 摘 要: 为开发新型荧光蛋白标记乳酸菌以填补国内研究空白，利用pSIP 载体，构建了以红色荧光蛋白mCherry 为标记，并以乳酸菌胆盐水解酶基因 bsh 为报告基因的乳酸菌融合表达系统。在 4 种不同启动子 (PsppA 、PldhL 、 P32 和 PslpA) 调节下，相继实现了融合基因的诱导型和组成型表达，表达的融合重组蛋白 mCherry-BSH 同时检测 出红色荧光活性和胆盐水解酶BSH 活性。mCherry 红色荧光标记的乳酸菌融合表达系统的成功构建不仅为研究 乳酸菌在生物体内的分布、定植及存活情况从而揭示其益生功能的作用机理提供有利条件，也为更多活性蛋白在 乳酸菌宿主中的表达、细胞定位、功能鉴定的研究奠定基础。 : mCherry 红色荧光标记，pSIP 载体，启动子，植物乳杆菌，融合表达，胆盐水解酶 Construction and application of mCherry red fluorescent protein fusion expression system in lactic acid bacteria Ying Chen, Peijuan Wang, Wenjun Zhang, Qiuxu Yang, and Yao Yang Jinling College , Nanjing Normal University , Nanjing 210097, Jiangsu , China Abstract: In order to enrich the library of domestic research about new red fluorescent marker in lactic acid bacteria (LAB), we described a new fusion expression system in Lactobacillus plantarum WCFS1 based on the pSIP vector. This system contained red fluorescent protein mCherry as a marker and bile salt hydrolase gene (bsh) as a reporter gene. Moreover, in this study, four dif