第一章细胞培养的设施与基本条件.pptVIP

植物细胞工程实验室的常用仪器设备有： 光照培养箱：植物材料少量培养；光照、暗箱；调湿与不可调湿；人工气候箱（全自动调温、调湿、控光） 人工气候室：模拟自然界的各种气象条件，精确控制室内的温度、光照、湿度、CO2等，在种子发芽、植物培养、组培、植保等领域应用广泛 摇床：细胞悬浮培养，常用振荡速度100 r/min 培养瓶：玻璃三角瓶、试管、光口玻璃瓶；硼硅酸盐玻璃器皿 2.1 动物细胞工程实验室的常用仪器设备有： 培养箱（恒温培养箱和CO2培养箱）、显微操作仪、细胞融合仪、细胞冷冻储存器（程序化冷冻仪和液氮容器）、培养用器皿、手术器械 2.2 植物细胞工程实验室的常用仪器设备有： 光照培养箱、人工气候箱、摇床和培养瓶 第2章 清洗与消毒 离体培养的细胞对任何有害物质都十分敏感，微生物、 细胞碎片以及非营养性化学成分都可能影响细胞的生长， 对培养器皿清洗与消毒的要求极为苛刻。因此，清洗和消 毒是否彻底直接关系到细胞培养的成败。掌握清洗、消毒 知识，学会清洗、消毒方法是细胞培养工作的基本功。 洗涤液的配制 一、清洗 玻璃器皿：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗清洗后的玻璃器皿要求干净、透明、无油迹，且无任何残留物质 新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于4 h），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃烘箱内烘干备用。 使用过玻璃器皿：先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，或浸泡在0.5％的清洗剂中超声清洗（比色皿决不可超声），然后用自来水彻底洗净去污剂，用无离子水洗两次，烘干备用（计量仪器不可烘干）。清洗后器皿内外不可挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉擦洗），重新清洗。 胶塞清洗 新购置的瓶塞带有滑石粉及杂质。 方法：先用自来水冲洗；每次用后立即置入水中浸泡，用2%NaOH （洗衣粉）煮沸10~20min；自来水冲洗后，1%稀盐酸浸泡30min， 或蒸馏水冲洗后再煮沸10~20min，晾干备用。 聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，无毒、特殊包装优点在生物学实验中应用越来越广泛。第一次使用塑料器皿时，可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH = 1）清洗，接着依次用无离子水、1 mol/L KOH和无离子水清洗，然后用10-3 mol/L EDTA 除去金属离子的污染，最后用无离子水彻底清洗，以后每次使用时，可只用0.5％的去污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净即可。 使用过程中，注意：防止划痕；用后及时浸泡 塑料器皿的清洗 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可以用热洗衣粉水洗净），需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。 金属用品洗涤 除菌过滤器洗涤 用清水冲洗后，用洗液冲洗，再用清水冲洗，最后用蒸馏水冲 洗，晾干备用。 包装 便于消毒、储存，防止落入灰尘及消毒后再次被污染 灭菌工作是极其重要的。对于初学者来说， 首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台台面，未处理的工具和手等。 无菌的范畴：高压高温处理（工具、器皿、培养基等）  物理或化学处理；火烤后的物体；  健康的动植物不与外部表面接触的组织内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但不会影响培养，也不会污染） 二、消毒 消毒方法 物理灭菌法：紫外线、电离辐射、湿热、干热、过滤等 化学消毒法：使用灭菌剂或抗生素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等 1、紫外线消毒 适用于实验室空气、操作台面和一些不能用于湿热、干热灭菌的培养器皿的消毒，如塑料培养皿和培养板 破坏微生物的核酸和蛋白质使其失活；臭氧杀死微生物 主要是利用紫外灯进行照射，培养室灯距地面不超过2.5m，离工作台面不超过1.5m，物品不互相遮挡。灭菌时间20~30min。注意：关灯5 min后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。 2、电离辐射消毒 使用放射性核素产生的X线和加速器等发出的辐射进行灭菌消毒 适用于消毒量大和不适于做高压或滤过等培养用品，如培养瓶、培养皿、培养板、注射器、移液器枪头、离心管等 优点：灭菌时物品不会升温，可直接对密封包装物品进行灭菌 缺点：诱变作用很强，不适合消毒活的生物材料 3、湿热消毒 即高压蒸汽消毒，使用最广泛、效果最好的消毒方法 常用物品消毒压力及时间：培养液和橡胶制品115℃、10min；布类、玻璃制品及金属器械为121.3℃、20min。 4、干