DNA的粗提取和鉴定分析.pptVIP

1.如果用棉花植株作为实验材料做《DNA的粗提取与鉴定》实验，请你说出可能用到的二种化学试剂名称，并说出这种试剂在该实验中的用途。（4分） 氯化钠溶液：不同浓度的NaCl溶液，能使DNA溶解或析 出，从而起到提取DNA的作用； 95%乙醇：DNA不溶于酒精，可以用于提取出含杂质较少的DNA； 二苯胺：作为鉴定DNA的试剂； 洗涤剂：能溶解细胞膜，有利于细胞内DNA的释放（答出每种试剂的名称和用途得2分）。 * 2：下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是（ ） C 0.14 DNA 溶解度 0.14 0.14 0.14 DNA 溶解度 DNA 溶解度 DNA 溶解度 A B C D NaCl浓度 NaCl浓度 NaCl浓度 NaCl浓度 * C 0.14 DNA 析出量 0.14 0.14 0.14 DNA 析出量 DNA 析出量 DNA 析出量 A B D NaCl浓度 NaCl浓度 NaCl浓度 NaCl浓度 3：下列图示中能反映DNA析出量与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是 （ ） B 溶解度与析出量的关系是相反 * 4.江苏有一道凉菜——白斩鸡，鸡肉嫩而不韧、味美鲜香。其加工过程中添加了从木瓜中提取的酶制成的“嫩肉粉。”下列有关嫩肉粉的叙述中，正确的是(　　) A．“嫩肉粉”可能是通过催化细胞间的纤维素水解而实现“嫩肉”的 B．与高温蒸煮相比，“嫩肉粉”是通过降低反应活化能而实现“嫩肉”的 C．“嫩肉粉”应在蒸煮鸡肉时加入，才能实现“嫩肉” D．“嫩肉粉”是一种化工产品，不利于人体健康，实际应用中能少则少、能无则无 B * * * * * DNA的粗提取与鉴定 染色体成分 蛋白质 RNA(少量) DNA 提取DNA的基本思路： 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 * DNA的粗提取与鉴定 1．原理、方法和目的 基本原理 方法 目的 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 溶于NaCl溶液中并稀释 ①NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质 DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质（酶的专一性） DNA不溶于酒精溶液 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 DNA可被二苯胺染成蓝色 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA 高温 DNA耐高温 DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 加入洗涤剂 * 1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。 4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 提取DNA的原理包括DNA的 两个方面 溶解性和耐受性 1.DNA的粗提取实验原理 * 2.实验材料①动物 鸡血细胞液的优点 提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取 ②植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。 * 3、方法与过程 1).制鸡血细胞液 0.1g/mL柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。 离心或静置后去掉上清液 血浆 血细胞 * 提取细胞核物质： 溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)得到DNA滤液 析出DNA： DNA黏稠物再溶解：在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。